论著
李允兴, 赵家慧, 陈可一, 张博文, 李昀桥, 范韬, 何丽娟, 裴雪涛, 李艳华
目的 探究骨形成蛋白4（BMP4）对小鼠造血干/祖细胞（HSPC）体外扩增的作用。方法 用磁珠分选法富集小鼠骨髓细胞中的c-Kit+造血细胞,分成对照组（添加基础培养基）及实验组（每天补充40 ng/ml BMP4）进行体外培养。培养4 d后,进行细胞计数及存活率分析,并结合流式细胞术分析细胞中HSPC的比例及数量,采用造血集落形成实验分析细胞的造血集落形成能力。在此基础上,结合BMP4信号通路抑制剂LDN193189（500 nmol/L）处理,通过流式细胞术检测阻断该信号通路对细胞中HSPC比例的影响,并结合实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析细胞中毒性应激和凋亡相关基因表达水平。结果 c-Kit+造血细胞体外培养4 d后,对照组及实验组细胞数量分别是起始接种数量的（3.20±0.33）倍及（5.00±0.61）倍。结合流式细胞术对细胞中HSPC比例分析的结果,培养4 d后对照组及实验组Lineage-Sca-1+c-Kit+（LSK）细胞数量分别较起始接种细胞中LSK细胞数量扩增了（2.62±0.09）倍及（5.67±0.11）倍。造血集落形成实验结果表明,对照组形成了（49.25±6.99）个集落,而实验组可形成（69.95±3.40）个集落。培养基中添加LDN193189（500 nmol/L）培养4 d后,LSK细胞数量为（3.16±0.43）×104个/孔,较未添加LDN193189组下降了（38.27±7.44）%。qRT-PCR结果表明,与对照组相比,BMP4处理组降低了蛋白质毒性应激相关基因和促凋亡相关基因的表达。结论 BMP4处理能够促进小鼠骨髓造血细胞的体外扩增,并有效提高细胞中HSPC的增殖及造血细胞集落形成能力。
