军事医学

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战创伤休克救治中冻干血浆与人血白蛋白

zhaoxiong

2015, 39(3): 0-0.

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冻干血浆和人血白蛋白在战创伤休克治疗中发挥着举足轻重的作用。冻干血浆是由健康人血浆根据血型按照一定比例混合经病毒灭活和冷冻干燥制成，具有与新鲜冰冻血浆基本相同的成分，对于战创伤休克、烧伤等具有良好的治疗效果，也是各国军方的研究热点。随着病毒灭活技术的不断进步，冻干血浆的安全性不断提高，已经在军队应用，在特殊情况下可以民用。白蛋白是血浆中含量最多的蛋白，具有维持血浆胶体渗透压，结合与运输血液中小分子物质等生理功能。目前上市的人血白蛋白包括血浆来源和重组来源的白蛋白，二者在分子组成、结构及生理功能上基本一致，在人体内的耐受性、安全性、及药物代谢动力学等方面也没有明显差别。尽管对人血白蛋白在休克救治中的作用曾存在争议，其在失血性休克、烧伤等的治疗中发挥着不可替代的作用。随着技术的不断进步，冻干血浆和人血白蛋白的质量将不断提高，更加安全、高效、经济，更加适用于战场环境。

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特异性人免疫球蛋白与传染性疾病的防治

mayuyuan

2015, 39(3): 0-0.

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特异性人免疫球蛋白指针对某一特定病原体或生物毒素等的人免疫球蛋白，是血液制品的重要品种，多用于预防和治疗一些发病率高、感染后果严重、无特效治疗方法的病原体感染，在传染性疾病的防治中具有其他药物不可比拟的优点。国外特异性人免疫球蛋白上市品种较多，而国内由于技术瓶颈约束、经济效益有限等原因，新型特异性人免疫球蛋白的研发进展缓慢。本文对多种特异性人免疫球蛋白及其对于传染病的防治作用进行了综述。

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凝血因子与创伤止血

lvmaomin

2015, 39(3): 0-0.

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凝血因子参与机体凝血过程的内、外源性途径，与机体抗凝系统相互协调，两者的动态平衡维持着体内血液正常的生理状态。本文从分子结构、理化特性、生理功能等方面对参与创伤止血相关的凝血因子进行了详述，同时，对其在创伤出血的止、凝血方面发挥的重要作用及相关凝血因子类制品的研究进展、使用现状进行了综述，以期为凝血因子类药物的研发及应用提供借鉴。

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确保血液制品病毒安全性的控制措施

mayuyuan

2015, 39(3): 0-0.

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血液制品是以健康人血浆为原料生产制备，必然存在传播病毒的风险。人们采取多种预防控制措施来确保血液制品的病毒安全性。这些措施包括原料血浆的控制、生产过程中的病毒灭活/去除处理、严格遵守药品生产质量管理规范。本文将重点对前两项措施进行综述。未来，新发传染病病原体将对血液制品的病毒安全性造成新的威胁，因此需不断研究新的应对措施。

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人血浆凝血因子Ⅷ柱纯化前处理方法的比较

wangfang

2015, 39(3): 0-0.

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目的：对人血浆凝血因子Ⅷ制备过程中四种柱纯化前处理方法进行比较，分析各种处理方法的优、缺点，为血源凝血因子Ⅷ的纯化制备提供参考和借鉴。方法：冷沉淀经Tris溶解后的上清，分别用甘氨酸沉淀法、PEG沉淀法、酸沉淀法和氢氧化铝凝胶吸附法四种方法处理；处理后上清用活化的部分凝血活酶（APTT）法测定凝血因子Ⅷ活性，计算总活性回收率和样品的比活性，并通过非还原性SDS-PAGE电泳进行去除杂蛋白效果对比。结果：甘氨酸沉淀法总活性回收率最高（94.00%±7.60%），其次是酸性沉淀法（89.47%±2.60%）、PEG沉淀法（80.92%±9.67%），氢氧化铝吸附法的总活性回收率最低（78.65%±7.52%）；甘氨酸沉淀法与PEG沉淀法去除杂蛋白效果优于酸性沉淀法和氢氧化铝吸附法；经四种不同方法处理后，甘氨酸沉淀法所得样品中凝血因子Ⅷ比活最高（0.6856±0.1258IU/mg），其次是PEG沉淀法（0.5773±0.0787IU/mg）、酸性沉淀法（0.3885±0.0301IU/mg），氢氧化铝吸附法所得样品比活最低（0.2879±0.0472IU/mg）。结论：四种方法中甘氨酸沉淀法和PEG沉淀法较优，由于PEG沉淀法操作较甘氨酸沉淀法更加简便、快捷，实际生产过程中采用PEG沉淀法较为合适。

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人凝血因子Ⅶ重组腺病毒载体的构建及鉴定

jiefeilong

2015, 39(3): 0-0.

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目的构建表达人凝血因子Ⅶ（FⅦ）的重组腺病毒载体，利用腺病毒载体介导哺乳动物细胞表达重组人FⅦ的研究。方法利用BamHⅠ和EcoR V双酶切从pcDNA 3.1-FⅦ载体得到FⅦ基因片段，补平后，插入经SalⅠ单酶切、补平并去磷酸化处理的含绿色荧光蛋白表达盒的pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体，构建pAdTrack-CMV-FⅦ, 用酶切和测序鉴定；经PmeⅠ单酶切线性化后，pAdTrack-CMV-FⅦ在BJ5183感受态菌内与pAdEasy-1腺病毒骨架发生同源重组，构建重组表达FⅦ的腺病毒质粒pAd-FⅦ；经PacⅠ酶切后的pAd-FⅦ，使用PEI试剂转染293A细胞，包装表达FⅦ的重组腺病毒Ad-FⅦ；利用Western Blot检测重组腺病毒Ad-FⅦ介导293A细胞表达FⅦ的蛋白水平；通过观察GFP的表达来判断质粒转染及病毒感染细胞的效率。结果经酶切和测序鉴定，FⅦ被克隆到pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体，获得重组质粒pAdTrack-CMV-FⅦ；将其与pAdEasy-1在细菌内发生同源重组，成功获得FⅦ重组腺病毒质粒pAd-FⅦ；在293A细胞内包装重组腺病毒，用Western Blot检测到FⅦ蛋白的表达。结论成功构建了重组腺病毒Ad-FⅦ，并且能够实现rFⅦ在哺乳动物细胞中表达，从而为利用哺乳动物细胞生产制备rFⅦ奠定了基础。

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α2-巨球蛋白活性检测方法的建立与优化

皇甫超济

2015, 39(3): 0-0.

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目的建立α2-巨球蛋白(α2-macroglobulin , α2-M)活性检测方法，检测Cohn组分Ⅳ中α2-巨球蛋白的活性。方法 α2-M可与胰蛋白酶相互作用形成“α2-M—胰蛋白酶复合物”，利用酶标仪检测出“α2-M—胰蛋白酶复合物”与小分子底物BAPNA（Na-苯甲酰-DL-精氨酸-对硝基酰胺盐酸盐，Na-Benzoyl-DL-arginine 4-nitroanilide hydrochloride）显色反应后的吸光值（410nm），根据建立的血浆α2-M活性标准曲线，定量计算出组分Ⅳ浓缩液中α2-M的活性。结果通过对实验体系中的几个关键实验条件进行优化，建立了血浆α2-M活性标准曲线，并计算出组分Ⅳ浓缩液中α2-M活性的平均值为1.578PU/ml。结论以正常人混合血浆作为参考标准品，用发色底物法检测组分Ⅳ浓缩液中α2-M的活性，方法简便易行，为α2-M制备过程中活性测定提供方法。

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加速试验预测纤维蛋白止血贴稳定性

赵雄

2015, 39(3): 0-0.

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目的：通过加速试验推算纤维蛋白止血贴的保存期。方法：根据多点等温稳定性原理，温度选择70℃、80℃和90℃，将纤维蛋白止血贴样品放入不同温度培养箱中，在不同时间点（70℃取样时间为1、3、9、10、12、13、20、25、29、32天；80℃取样时间为1、3、13、15、16、17天；90 ℃取样时间为1、2、4天）取出样品测定其活性，根据活性与对应时间建立纤维蛋白止血贴的模拟一级热降解曲线，得出不同温度下纤维蛋白止血贴的热降解速度，之后分别建立纤维蛋白止血贴热降解速度曲线和纤维蛋白止血贴贮存时间曲线，以此推算出纤维蛋白止血贴在4℃、25℃和37℃的保存期。结果：纤维蛋白止血贴在70℃、80℃和90℃时的热降解速度分别为0.0148，0.0247，0.1057。纤维蛋白止血贴在热降解速度曲线和纤维蛋白止血贴贮存时间曲线分别为y=-0.0399x＋4.445和y=-1.154x-0.376，据此推算出纤维蛋白止血贴在4℃、25℃和37℃的保存期分别为5734d，958d和345d。结论：纤维蛋白止血贴在25℃条件下可以保存2年以上。

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发色底物法在酶促反应初速度内测定α1抗胰蛋白酶的活性

张晋超

2015, 39(3): 0-0.

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目的优化发色底物法，使其在酶促反应初速度内测定α1抗胰蛋白酶(AAT)的活性并用于血浆蛋白纯化过程中各样品的活性检测。方法采用酶标仪动态监测模式观察酶浓度和反应时间对酶促反应的影响；计算初速度确定能被底物饱和的最大酶浓度。AAT与胰蛋白酶孵育，剩余靶酶和底物作用产生的吸光度可反映AAT的活性。通过△OD与AAT标准品活性进行拟合建立标准曲线，测定相关样品的活性并进行精密度和准确度验证。结果胰蛋白酶浓度为0.0625mg/ml，20min内酶促反应处于初速度内。AAT标准曲线范围为200-1200 IU/ml，相关系数大于0.99。该法测定Cohn Ⅳ、前处理液、洗脱峰样品中AAT的活性分别为720.59±18.63、601.84±19.18、568.09±24.83 IU/ml。每个样品之间的RSD小于10%，加样回收率均在90%-110%范围内。结论发色底物法经优化后，准确度和精密度大幅度提高，更加适用于实验室制备AAT或不同生产阶段样品的活性检测。

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原料血浆和凝血因子类产品中细小病毒B19污染情况调查

贾俊婷

2015, 39(3): 0-0.

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目的检测混合原料血浆和凝血因子类产品中人细小病毒B19（Human parvovirus B19，简称B19病毒）核酸，分析我国原料血浆及凝血因子类产品中B19病毒的污染情况。方法针对B19病毒的保守区域NS1区合成引物及探针，采用TaqMan实时定量PCR法检测混合原料血浆和四类凝血因子类产品中B19病毒核酸。结果混合原料血浆的B19病毒核酸的阳性率为59.49%（116/195），最高浓度可达1.35×1010 copies/mL。各类凝血因子类产品的B19病毒核酸的阳性率都很高，因子Ⅷ、凝血酶、纤维蛋白原以及凝血酶原复合物的阳性率分别为93.55%（29/31）、100%（10/10）、85.71%（6/7）和88.89（8/9）。结论我国混合原料血浆与凝血因子类产品中B19病毒的污染率较高，有必要进行原料血浆的B19病毒筛查，对于保障血液制品的病毒安全性有重要意义。

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水痘-带状疱疹病毒快速微量中和试验的建立与初步应用

王卓

2015, 39(3): 0-0.

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目的建立水痘-带状疱疹病毒（VZV）的快速微量中和试验筛查技术，用于高免原料血浆的筛选和VZV特异性免疫球蛋白（VZIG）的制备。方法参考FDA批准的VZIG制品，设立原料血浆的筛选滴度的下限；通过病毒滴度优化，设立快速微量中和试验筛查体系中的病毒使用滴度；建立筛选体系并引入VZIG国际标准品作为质量控制，对1:2~1:256倍稀释的各滴度的单人份和混合原料血浆进行测定，同时利用抗VZV中和抗体ELISA检测试剂盒VaccZyme复核快速微量中和筛选结果，对其灵敏度进行分析。结果快速微量中和筛选试验的中原料血浆的最低筛选下限为1:16（VZV中和抗体滴度不低于0.4IU/ml）；筛选体系病毒使用滴度为1500PFU/ml；20份单采血浆中有8人份的滴度≥1:16，混合血浆中无符合筛选标准的样本；ELISA的复核结果与快速微量中和试验呈良好的直线关系（r＝0.89524，P< 0.0001）。结论快速微量中和试验的灵敏性、通量和可操作性等，适于VZV高免原料血浆的筛选，解决了VZIG制备中原料血浆筛选的关键技术问题。

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人巨细胞病毒包膜糖蛋白B线性B细胞抗原表位的预测

闫晶晶

2015, 39(3): 0-0.

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目的通过生物信息学方法分析人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）包膜糖蛋白B （GlycoproteinB，gB)的结构及理化特性，预测包膜糖蛋白B的线性B细胞抗原表位。方法基于HCMV gB的序列，利用两种在线B细胞表位预测程序及DNAstar软件对gB进行预测；利用SWISS-MODEL服务器同源构建gB三级结构模型，进行进一步验证。结果综合多项分析，预测得到HCMVgB的多个线性B细胞表位，为后续验证其优势中和表位，建立富含高效价中和抗体的原料血浆的筛选方法奠定了基础。

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人细小病毒B19三种基因型通用核酸检测体系的建立与评价

贾俊婷

2015, 39(3): 0-0.

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目的建立能同时检测人细小病毒B19（简称B19病毒）三种基因型的通用核酸检测体系，并进行方法学评价。方法对B19病毒三种基因型代表毒株全序列进行比对，选取其保守区域（NS1区）设计B19病毒的通用引物和探针，通过全基因合成得到标准品质粒。为避免假阴性结果，在体系中引入竞争性噬菌体内标。将适宜浓度的内标添加到一系列梯度稀释的标准品质粒中，建立B19病毒荧光定量PCR标准曲线。对建立的B19病毒通用核酸检测体系分别进行敏感性、特异性、重复性等方法学评价。结果建立的B19病毒定量PCR检测体系的标准曲线在1×109 ~ 1×100copies/μL模板浓度范围内相关性良好。方法学评价显示，体系的最低检测下限为10copies/µL；与其他血源传播病毒等无交叉反应；批内和批间重复的变异系数均小于2%。结论建立了B19病毒三种基因型全检的通用核酸检测体系，不仅可用于B19病毒感染的诊断，还可用于血液和血液制品中B19病毒的NAT筛查，对于保障输血和血液制品的病毒安全性有重要意义。

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血液制品病毒灭活/去除技术平台的建立与应用

尹惠琼

2015, 39(3): 0-0.

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目的建立血液制品病毒灭活/去除技术，并应用于血液制品的病毒灭活/去除工艺验证。方法建立指示病毒库以及S/D处理法、低pH孵放法、干热法、巴氏消毒法、纳米膜过滤法等血液制品病毒灭活/去除技术，采用细胞病变法测定病毒滴度和Spearman and Karber法计算病毒滴度，病毒滴度降低量（LRV）≥4判为有效，对企业的血液制品样品进行病毒灭活/去除验证。结果 S/D处理法和低pH孵放法可有效灭活有包膜指示病毒，干热法和巴氏消毒法可有效灭活有包膜指示病毒和无包膜指示病毒，纳米膜过滤法可在一定过滤量范围内去除PPV指示病毒。结论建立的血液制品病毒灭活/去除技术可用于血液制品的病毒灭活/去除工艺验证，以提高血液制品的病毒安全性。

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口服盐酸羟考酮缓释片致排尿困难一例

尹月

2015, 39(3): 0-0.

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临床药师，药学监护，不良反应

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嗜麦芽窄食单胞菌热休克蛋白HSP70的表达、纯化及抗原性研究

yangguangxu

2015, 39(3): 0-0.

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【摘要】目的验证嗜麦芽窄食单胞菌热休克蛋白HSP70(DnaK)的抗原性方法以嗜麦芽窄食单胞菌K279a为模板，PCR扩增DnaK基因的全序列，将该序列连接到pET-30a载体，转入大肠杆菌BL-21中，经1mM的IPTG 37℃诱导表达，目的蛋白纯化后进行Western blot免疫印迹。结果 Western blot证实表达的重组蛋白Hsp70具有抗原性。结论嗜麦芽窄食单胞菌HSP70可作为保护性抗原候选分子，为后续该菌疫苗的研究奠定了基础。

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血液制品及其在军事医学中的应用

章金刚

2015, 39(3): 0-0.

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[摘要] 自二战期间第一个血液制品，即人血白蛋白问世以来，血液制品在战创伤救治与急救医学中发挥着不可替代的作用。目前，血液和血液制品的保障体系日益完善，新型血液制品的研发也取得了巨大进展。病毒灭活通用型冻干血浆已有军方采购；白蛋白作为战创伤急救用理想的抗休克血容量扩张剂，出现了不同浓度、高纯及软包装产品；特异性免疫球蛋白制品在救治战创伤感染、新发传染病防治、应对生物战剂与生物恐怖潜在威胁等方面，已为某些发达国家的常规贮备；基于纤维蛋白原、凝血酶等制备的局部止血剂以及重组凝血因子Ⅶ的整体止血效果，使得这类产品在战创伤出血救治中的作用日益显现；作为防治战创伤脓毒血症救治的的潜在药物，人蛋白C、抗凝血酶等抗凝蛋白的研究已经取得了明显进展；α2-巨球蛋白等蛋白酶抑制剂，有望成为特种医学救治的良药。可以认为，在未来战争需求和非战争军事行动中，血液制品将会发挥更大的作用。 [关键词] 血液制品；血浆衍生物制品；白蛋白；病毒灭活通用冻干血浆；免疫球蛋白；凝血因子

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血液制品及其在伤病救治中的应用

lvmaomin

2015, 39(3): 0-0.

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[摘要]自二战期间第一个血液制品，即人血白蛋白问世以来，血液制品在战创伤救治与急救医学中发挥着不可替代的作用。目前，血液和血液制品的保障体系日益完善，新型血液制品的研发也取得了巨大进展。病毒灭活通用型冻干血浆已有军方采购；白蛋白作为战创伤急救用理想的抗休克血容量扩张剂，出现了不同浓度、高纯及软包装产品；特异性免疫球蛋白制品在救治战创伤感染、新发传染病防治、应对生物战剂与生物恐怖潜在威胁等方面，已为某些发达国家的常规贮备；基于纤维蛋白原、凝血酶等制备的局部止血剂以及重组凝血因子Ⅶ的整体止血效果，使得这类产品在战创伤出血救治中的作用日益显现；作为防治战创伤脓毒血症救治的潜在药物，人蛋白C、抗凝血酶等抗凝蛋白的研究已经取得了明显进展；α2-巨球蛋白等蛋白酶抑制剂，有望成为特种医学救治的良药。可以认为，在未来战争需求和非战争军事行动中，血液制品将会发挥更大的作用。

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