军事医学

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战时伤病员分类包的研制

林乐拉

2020, 44(2): 0-0.

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【摘要】目的　研制一种战时伤病员分类包，在野战环境下对伤病员进行快速分类和紧急救治，提高分类效率。方法　2018年3月至 2018年5月原空军总医院野战医疗队在跨区机动化训练和考核中，对通过的23批次534名伤病员进行分类包试用。结果　分类包具备通气、止血、包扎、生命体征测量、污物处理、伤病员信息登记、佩带分类牌等功能，10名分类员经使用后均表示满意。结论　研制的分类包设计合理、功能齐全，能满足野战环境下快速分类和紧急救治，值得推广。

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实验研究

MRL/lpr狼疮鼠肾组织氧化应激相关基因的表达差异

RuonanDang

2020, 44(2): 0-0.

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[摘要] 目的探讨MRL/lpr狼疮鼠肾组织氧化应激相关基因的表达差异，分析差异基因在SLE发病中的可能机制。方法 10周龄雌性MRL/lpr狼疮鼠（模型组）和C57BL/6雌性正常小鼠（对照组）各10只，同等条件下持续喂养12周后处死，取肾组织，应用实时免疫荧光定量PCR方法检测肾组织氧化应激相关基因表达情况，运用生物信息学方法对差异表达的基因进行筛选和分析。结果共筛选得到5个差异表达基因：NGB、SQSTM1、SOD3、GSR、GPX7（筛选标准为|log2FC|＞1且P＜0.05），其全部为下调基因；差异表达基因富集通路为谷胱甘肽代谢通路和甲状腺激素合成通路。结论 MRL/lpr狼疮鼠肾组织多种氧化应激相关基因表达发生变化，狼疮鼠体内可能同时存在缺氧引起的氧化反应过强以及抗氧化相关基因表达下调造成的自身抗氧化系统功能下降的情况。

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人 AP2β 基因慢病毒表达载体的构建及其对肝癌 HepG2 细胞生长的影响

霍楠,马路园,朱祥,丛瑞,初众,唐枝,张德宇,赵彩彦,徐小洁

2020, 44(2): 0-0.

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[摘要] 目的：构建人 AP2β 基因慢病毒表达载体，并检测其过表达对肝癌细胞HepG2 生长的影响。方法：从人乳腺文库中采用 PCR 技术扩增出人 AP2β 基因编码序列，并将其插入 pCDH 载体，获得 pCDH-AP2β 真核表达载体；将其与包装载体转染 293T，包装成 Lenti-AP2β 慢病毒并测定病毒滴度，感染肝癌HepG2 细胞，Western 印迹检测病毒载体介导的 AP2β 蛋白的表达情况，并进行生长曲线实验研究过量表达 AP2β 对 HepG2 细胞生长的影响。结果：双酶切和 Western 印迹表明 pCDH-AP2β 真核表达质粒构建成功，包装成滴度为 2.5×107 pfu/mL的 Lenti-AP2β 慢病毒载体；将此慢病毒载体感染 HepG2 细胞, Western 印迹显示慢病毒载体成功表达 AP2β，生长曲线实验结果表明，AP2β 过表达可抑制肝癌细胞 HepG2 的生长。结论：构建了 AP2β 的慢病毒表达载体 Lenti-AP2β，在 HepG2 细胞中过量表达 AP2β 可抑制细胞的生长。本实验为进一步研究 AP2β 在肝癌中的功能奠定了基础。

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地塞米松对急性重度骨髓型放射病小鼠治疗作用研究

叶雨萌

2020, 44(2): 0-0.

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目的探讨地塞米松对小鼠急性重度骨髓型放射病的治疗作用及给药方案。方法雄性 SPF 级 C57BL/6N 小鼠125只随机分为四组：对照组（C组）、照射组（R组）、地塞米松3d组（DEX3d）、地塞米松7d组（DEX7d）。采用 60Coγ射线单次全身照射，剂量为8Gy，地塞米松治疗组在照后 24h 腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液（4.5 mg/kg），1次/d，DEX3d和DEX7d组分别连续应用3d和7d，对照组和照射组腹腔注射生理盐水，通过30d存活率、肺功能、血常规、TNF-α等炎性细胞因子含量、小肠、肺和脑组织病理学改变等分析地塞米松治疗效果。结果与C组比较，R组照后12d内全部死亡；潮气量、每分通气量、吸气峰值及呼气峰值均明显降低；血液及小肠、肺和脑组织中TNF-α及TGF-β显著升高；空肠绒毛缩短、缺失或倒状，隐窝可见较多坏死细胞；肺组织主要病变为局部肺泡腔内可见粉红色渗出液，肺间隔炎细胞浸润；脑组织可见神经元核固缩深染，血管周间隙增大。与R组相比，DEX3d组存活率显著提高；DEX3d组每分通气量显著升高（P < 0.05）且与C组无显著差异；DEX3d组的各项肺功能指标均优于DEX7d组，但无显著差异；DEX3d组及DEX7d组小鼠血液及小肠、肺和脑组织中TNF-α、TGF-β显著降低且与C组无显著差异；DEX3d组对于空肠、肺及脑组织病理改变也有显著改善。结论地塞米松可有效治疗小鼠急性重度骨髓型放射病，且给药3d效果优于给药7d。 [关键词]急性重度骨髓型放射病；地塞米松；治疗

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Runx1c及Gata2表达质粒构建及其在肝脏细胞中表达的鉴定

李艳华,张明明,张博文,王思涵,覃金华,曾泉,范增,何丽娟,岳文,裴雪涛,孙自敏

2020, 44(2): 0-0.

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目的：构建含有Runx1c及Gata2基因的表达质粒，探讨水动力转染法能否实现其在小鼠肝脏中表达。方法：采用PCR的方法分别扩增Runx1c及Gata2基因序列，并分别连入T载体中，通过双酶切、连接反应将两个基因序列分别连入慢病毒载体pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV中。将含Runx1c及Gata2基因的慢病毒毒液转染至L-02细胞，通过Q-PCR的方法检测目的基因的表达。通过水动力高压转染方法将此两种质粒通过尾静脉注入小鼠体内，于转染24小时，取小鼠肝脏组织，对肝组织切片进行抗RUNX1及GATA2抗体的免疫荧光染色；于转染72小时，通过流式细胞术分选肝组织中GFP+细胞，Q-PCR检测Runx1c、Gata2及造血相关基因的表达。结果：经双酶切及测序鉴定证明pCDH-MCS-T2A-Runx1c-copGFP-MSCV、pCDH-MCS-T2A-Gata2-copGFP-MSCV质粒构建成功。通过体外实验证实这两个载体携带的Runx-1及Gata2基因能在人肝细胞系L-02中表达。水动力高压转染法可以使含Runx1c及Gata2的质粒进入肝脏组织，并在肝细胞中表达RUNX1及GATA2蛋白。通过分选肝组织中GFP+细胞，可发现这些细胞内过表达Runx1c及Gata2基因，FLI-1、Erg基因的表达也明显提高。结论：成功构建了含有造血转录因子Runx1c、Gata2基因的表达载体，并通过水动力转染法实现Runx1c、Gata2的表达载体在小鼠肝脏中的表达，为进一步研究肝脏中过表达造血转录因子能否实现肝细胞转分化为造血细胞及观察其对造血系统修复的作用奠定基础。

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美国防高级研究计划局2019年度生物科技项目进展分析

张音

2020, 44(2): 0-0.

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美国防高级研究计划局是负责美国防高新技术研发工作的主导机构，以感知和引领国防科技未来发展新动向而著称。该文对美国防高级研究计划局2019年度生物科技项目的进展情况进行深入分析，提出启示借鉴，以期为我国国防生物科技发展提供有价值的参考。

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综述

神经小胶质细胞在细菌性脑膜炎中的作用研究进展

高扬

2020, 44(2): 0-0.

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小胶质细胞在细菌性脑膜炎的病理生理过程中起着关键的调控作用。初步研究表明脑内小胶质细胞的两种极化状态与细菌性脑膜炎的发生发展密切相关，调控小胶质细胞的两种极化状态之间的平衡，对细菌性脑膜炎的治疗和预后具有重要作用。

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实验研究

杜氏高生熊虫实验室培养体系的建立

陈俊,李磊,郭燕,毕瑞,沈磐,王立志,杨冬,张令强

2020, 44(2): 0-0.

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目的:建立国内首个纯种水熊虫——杜氏高生熊虫（Hypsibius dujardini）的实验室培养体系。方法:于河南省伏牛山老界岭地区采集野生苔藓样品，从中分离、收集混合种属水熊虫及其卵；以土生绿球藻为食物，在琼脂糖板上分离纯化混合种属水熊虫，使用悬浮培养法进一步扩繁纯种水熊虫；使用形态分类学方法鉴定水熊虫种属。结果:野生苔藓中分离得到混合种水熊虫；分离同窝卵后孵化得到纯种水熊虫，进一步扩繁得到单一种属实验室培养体系；以形态分类学方法初步鉴定该物种为杜氏高生熊虫（Hypsibius dujardini）。结论:该研究在国内首次建立了杜氏高生熊虫（Hypsibius dujardini）的实验室培养体系，为极端环境耐受机制研究提供了动物模型。

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实验研究

100Mev质子照射对肿瘤细胞线粒体氧化损伤及其作用机制研究

LiuYiKe,SuiLi,Xieying,WangQiaojuan,LiuXiaodan,GongYihHao,KongFuquan,LiuJiancheng,ZhangYanwen,XieDafei,ZhouPingkun,GuanHua,JiangYiguo

2020, 44(2): 0-0.

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目的研究100 Mev质子照射对人宫颈癌细胞线粒体氧化损伤及其作用机制。方法采用CCK-8法检测照射后细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡变化，DCFH-DA标记法检测活性氧（ROS）含量，线粒体呼吸链复合体Ⅰ检测试剂盒检测线粒体呼吸链复合体Ⅰ的活性。结果与未照射组相比，低剂量0.5Gy质子照射组的细胞增殖、凋亡、活性氧（ROS）以及线粒体呼吸链复合体Ⅰ的活性的变化都不明显。高剂量8Gy质子照射组在照射后72h细胞增殖受到抑制；细胞凋亡结果显示，随着时间的延长，细胞凋亡比率呈增加趋势，且凋亡率存在一定的时间依赖关系；检测细胞ROS产生发现，8Gy质子照射后细胞ROS从16小时开始增加，24小时达到峰值后逐渐下降；进一步检测细胞线粒体呼吸链复合体Ⅰ的活性，高剂量8Gy质子照射后24和48h均可抑制细胞线粒体呼吸链复合体Ⅰ的活性。结论高剂量质子照射可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖，并促进凋亡，这可能与照射后细胞ROS增加和细胞线粒体呼吸链复合体Ⅰ的活性受到抑制有关。

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实验研究

蜡样芽胞杆菌plcR无义突变株特征分析

王晓景,王东澍

2020, 44(2): 0-0.

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[摘要] 目的炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌相比，plcR基因640位发生无义突变，利用蜡样芽胞杆菌HN001及其plcR基因无义突变株HN1M，研究plcR对胞外酶活性，毒力基因的转录水平和致病性的影响，为进一步研究炭疽芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌的进化关系提供参考。方法比较蜡样芽胞杆菌HN001和HN1M的生长曲线、产胞外酶能力、生物膜形成和对小鼠的致病性，RT-PCR分析两菌株中溶血酶、磷脂酶和肠毒素基因的转录水平。结果与HN001相比，HN1M稳定期菌密度和生物膜形成能力显著升高，溶血能力、产卵磷脂酶能力和对小鼠致病性显著减弱；HN1M中毒力基因hlyD、clO、hly、cerA、cerB、plcA、cytK、nhe和hblCDB转录水平显著下调；tlyA和hblA转录水平无显著差异。结论推测HN1M中PlcR不表达，造成群体感应迟缓，稳定期细菌密度提高，且使菌株溶血活性、卵磷脂酶活性和对小鼠的致病性显著降低，生物膜形成能力显著提高。推测plcR正调控溶血素基因hlyD、clO、hly，磷脂酶基因cerA、cerB、plcA，细胞毒素K基因cytK，非溶血性肠毒素基因nhe和溶血素BL基因hblCDB，但可能不调控溶血素基因tlyA和溶血性肠毒素基因hblA。该研究表明plcR无义突变能够显著减弱蜡样芽胞杆菌的致病性，为开发蜡样芽胞杆菌工程菌和研究plcR的功能提供了新思路。

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生物钟对脂肪组织功能调节作用的研究进展

王伟

2020, 44(2): 0-0.

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生物钟是生物适应环境周期性变化的一种内在机制，是体内无形的“钟表”。生物钟对机体健康有着不可或缺的积极作用，生物钟表达紊乱导致一系列相关疾病的发生和发展，严重影响健康或生存。近年来大量的研究发现，生物钟基因的改变可引起脂肪组织功能的改变。分析表明，外界因素通过影响生物钟节律的表达，从而影响脂肪组织的蛋白质组和功能震荡。本文就时钟蛋白及其关键信号通路在白色、棕色和米色脂肪组织中的功能作用及影响进行综述。

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1990年—2017年中国一氧化碳中毒死亡的变化趋势分析

高萌

2020, 44(2): 0-0.

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【摘要】目的：研究中国一氧化碳中毒死亡的变化趋势。方法：从2017年全球疾病负担研究中收集1990年至2017年中国及全球一氧化碳中毒的详细信息，根据性别、年龄、社会人口指数（SDI）等计算一氧化碳中毒年龄标准死亡率(ASR)的估计年百分比变化(EAPC)，以量化一氧化碳中毒ASR的变化趋势。并将中国及全球趋势进行对比。结果：2017年较1990年全球一氧化碳中毒死亡人数有所下降，而中国死亡人数上升，从1990年的13779例增长至2017年14255例，增长了3.45%；在此期间全球及中国的一氧化碳中毒ASR均呈下降趋势，但中国ASR下降趋势（EAPC=-0.46；95% CI -0.56~-0.36)明显低于全球水平（EAPC=-1.83；95% CI -2.10~-1.56)；中国一氧化碳中毒ASR的下降趋势在不同性别及年龄中是不同的，其中，男性呈下降趋势，女性呈上升趋势；最明显的下降为小于5岁的人群，而超过50岁的人群呈明显的上升趋势。结论：一氧化碳中毒在中国仍是一个重要的公共卫生问题，尤其应针对老年人建立更有效地预防及治疗方案。

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实验研究

AlphaLISA检测金黄色葡萄球菌肠毒素D

曹鹤译

2020, 44(2): 0-0.

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目的利用新型均相化学发光免疫分析技术（AlphaLISA）检测金黄色葡萄球菌肠毒素D（SED），并与传统酶联免疫吸附测定（ELISA）进行比较。方法采用SED 单抗偶联发光微球，生物素标记另一SED单抗，以及链霉亲和素偶联感光微球构建SED AlphaLISA检测体系；SED单抗包被，另一生物素标记SED单抗检测，链霉亲和素偶联辣根过氧化物酶（HRP）放大，构建SED ELISA检测体系。结果确定AlphaLISA发光微球和生物素标记抗体的最适稀释比例为1:50和1:1000；确定ELISA包被抗体的最适浓度为3 µg/mL，生物素标记抗体和链霉亲和素偶联HRP的最适比例为1:1000和1:2000；AlphaLISA对缓冲液和牛奶模拟样本SED的检出限为100 pg / mL，变异系数(CV)为0.3%~8.9%；ELISA对缓冲液和牛奶模拟样本SED的检出限为781.29 pg/mL，变异系数为1.0%~19.8%；两种方法均不与其他型肠毒素抗原产生交叉反应。结论 AlphaLISA检测SED与ELISA相比灵敏度更高，精确性更高。

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实验研究

北京市自然景区啮齿动物病原体感染调查研究

陈津津

2020, 44(2): 0-0.

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目的：了解北京东灵山、云蒙山、十渡3个自然景区中啮齿动物的种类、分布以及病原体感染情况，为保障自然景区人民群众的健康安全和北京旅游资源的可持续发展提供科学依据。方法：采用夹夜法捕获啮齿类动物，针对伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi，B.b）、斑点热群立克次体（spotted fever group Rickettsiae, SFGR）、嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum, AP）、汉坦病毒（hantavirus, HV）、新布尼亚病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome buyavirus, SFTSV）5种病原体进行PCR或RT-PCR检测，并根据特异基因序列进行鉴别分析。结果共捕获啮齿类动物478只。东灵山景区存在HV、B.b、AP感染，云蒙山景区HV、B.b、SFGR感染，十渡景区存在HV感染。结论：北京自然景区啮齿动物种类丰富，携带多种病原体，在今后的防控工作中要加强防范。

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