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军事医学

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    实验研究
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    潜艇艇员出航前心理生理状况及相关影响因素分析
    安改红
    2019, 43(6): 0-0.
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    摘要 目的：探讨潜艇艇员出航前心理生理状况及其影响因素，为有效改善措施提供依据。方法：某潜艇男性艇员64人为研究对象，采用心境量表（POMS）、匹兹堡睡眠量表（PSQI）、疲劳自觉症状调查表、心理运动警觉性（PVT）进行情绪、睡眠、疲劳状况和认知反应能力的测试。结果：艇员情绪状态良好，愤怒（4.06±2.93）、抑郁（2.18±1.44）、慌乱（3.02±2.13）及情绪纷乱总分（96.73±19.23）低于常模(P＜0.001), 疲劳（5.68±3.53）、精力（13.78±5.02）、自尊（10.50±3.14）高于常模(P＜0.001);睡眠状态良好，PSQI(4.17±1.99)低于常模(P＜0.001)，睡眠障碍发生率为12.7%；疲劳自觉症状不明显，自感有轻度的疲劳感发生率为11.0%；人员反应能力良好，PVT平均反应时（303.90±49.26ms）高于常模（P＜0.001）。与未婚艇员比，已婚艇员POMS各负向因子显著升高、正向因子中精力及自尊感显著降低；睡眠及疲劳各指标显著升高；未婚且年龄≥25的艇员以上指标升高显著。结论 艇员出航前情绪、睡眠、疲劳状况和反应能力状态整体良好；年龄和婚姻状况是影响艇员心理生理状态的重要因素，重点关注人群为25岁以上未婚艇员。
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    RTCA与MTT法用于检测肠道微生物细胞毒性的比较研究
    宾蕾
    2019, 43(6): 0-0.
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    目的 运用实时细胞分析（Real-Time Cellular Analysis，RTCA）法和MTT比色法检测干酪乳杆菌、肠出血性大肠杆菌的细胞毒性，并比较两者优缺点。方法 将干酪乳杆菌及肠出血性大肠杆菌的菌液、菌体裂解液（MOI=200）以及上清液（25%）感染HT-29和LoVo细胞，经RTCA法和MTT法观察细菌对细胞的校正细胞指数（normalized cell index，NCI）及细胞活力的影响。结果 RTCA法与MTT法结果一致，干酪乳杆菌的活菌、菌体裂解液对HT-29细胞和LoVo细胞无明显毒性。肠出血大肠杆菌的活菌对HT-29细胞和LoVo细胞有明显毒性，其菌体裂解液对HT-29细胞有明显毒性、对LoVo细胞无明显毒性。在上清液实验中，RTCA法检测出干酪乳杆菌和肠出血大肠杆菌对HT-29细胞无明显毒性，而LoVo细胞受培养基影响未能正确反应出上清液细胞毒性结果。结论 RTCA法较MTT法更适用于细菌细胞毒性检测，具有众多优点，但存在注意事项。
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    水体扰动对铜绿微囊藻生长和酶活性的影响
    张灿
    2019, 43(6): 0-0.
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    通过模拟试验探究不同水体扰动条件对铜绿微囊藻生长的影响，研究静水组（0 r/min）和不同水体扰动程度下（40、80、120、200 r/min）藻类生长指标、水质指标以及酶活性指标的变化情况，分析指标之间相关性。结果表明，藻类在静水组或低扰动程度下（40和80 r/min）生长状况较差，在高扰动程度（120和200 r/min）下生长状况更好，其中120 r/min扰动组藻细胞密度、叶绿素a浓度、营养盐消耗量最大，抗氧化酶活性最高，该扰动条件最适合铜绿微囊藻的生长。藻细胞密度与超氧化物歧化酶（SOD）活性峰值呈正相关关系，与脂质氧化水平（MDA）呈负相关关系。MDA含量越低的扰动组SOD活性越高，藻细胞密度也越高。这表明不同扰动程度下藻类生长状况与抗氧化酶的活性具有关联，不同扰动程度下藻类抗氧化酶活性的差异是影响藻类生长的一个重要原因。
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    带GFP标签的SQSTM1真核表达载体的构建及功能验证
    朱祥
    2019, 43(6): 0-0.
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    目的 构建带绿色荧光蛋白报告载体（pEGFP-C1）的SQSTM1真核表达载体，在获得pEGFP-SQSTM1融合表达蛋白后，对其功能进行验证。方法 以人乳腺文库为模板，通过聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）扩增人SQSTM1基因编码序列，插入到pEGFP-C1载体中，把测序正确的重组质粒转染人胚肾293T细胞，蛋白质印迹法（Western blot）检测该融合蛋白表达情况；分别转染pEGFP-C1空载体、pEGFP-SQSTM1至乳腺癌细胞ZR75-1，荧光显微镜观察其在细胞中的定位情况；荧光漂白后恢复实验( fluorescence recovery after photobleaching, FRAP)验证pEGFP-SQSTM1在乳腺癌细胞中SQSTM1小体荧光漂白后恢复情况。结果 构建的pEGFP-SQSTM1表达载体与目的基因序列完全一致，Western blot检测蛋白表达成功；荧光显微镜观察pEGFP-SQSTM1表达产物主要以点状小体形式定位于乳腺癌ZR75-1细胞的胞质中；FRAP实验验证pEGFP-SQSTM1在乳腺癌细胞中SQSTM1小体荧光漂白后能够恢复。结论 成功构建pEGFP-SQSTM1真核表达载体，证实了其在人乳腺癌细胞ZR75-1中表达，表达蛋白以点状小体形式定位于细胞质中，为进一步研究SQSTM1小体的功能提供基础。
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    人LDHA基因真核表达载体的构建及其功能鉴定
    张德宇
    2019, 43(6): 0-0.
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    摘要：目的 构建带有GFP标签的人LDHA的真核表达载体，并对其生物学功能进行初步研究。方法 利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人LDHA基因，并将其克隆到pEGFP-C1载体上，经双酶切和测序鉴定成功后转染到肝癌HepG2细胞中，通过Western Blot检测其表达情况，免疫荧光检测其亚细胞定位，并用生长曲线、克隆形成以及划痕实验探究LDHA对肝癌Hep G2细胞增殖、迁移能力的影响。结果 从人乳腺文库中扩增获得大小约为1000bp的DNA片段，并成功克隆至pEGFP-C1载体上，经测序与目的序列完全一致；转染肝癌HepG2细胞后目的基因成功表达；荧光显微镜观察发现，pEGFP-LDHA主要聚集于细胞质中；细胞生长曲线和克隆形成实验结果显示，转染pEGFP-LDHA的肝癌细胞较空载体细胞增殖能力增强；划痕实验显示，转染pEGFP-LDHA的肝癌细胞较空载体细胞迁袭性增强。结论 成功构建了带GFP标签的人LDHA真核表达载体，为进一步研究LDHA在肝癌细胞中的功能奠定了基础。
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    凉血固元汤对肠道急性辐射伤大鼠肠道菌群的调节作用
    wangyuguo,Fengjian,Douyongqi
    2019, 43(6): 0-0.
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    [摘要] 目的 探讨中药复方凉血固元汤对肠道急性辐射损伤大鼠肠道菌群的调节作用。方法 选择81只雌性SD大鼠，随机选取6只作为空白组，其余大鼠采用60Co-γ射线照射制作肠辐射损伤模型，并随机分为模型组、金双歧组及凉血固元汤组，每组25只。照射后每日观察大鼠排便、死亡等一般情况，于照射后7d称取大鼠体重，并收集粪便样本用于肠道菌群检测，分析各组肠道菌群的α多样性和门、属水平上主要菌群相对丰度差异。结果 照射后3d开始各照射组大鼠出现腹泻、死亡等情况，以模型组最明显，照射后7d各照射组体质量显著低于空白组(P<0.01)，凉血固元汤组高于模型组(P<0.05)。肠道菌群进行α多样性比较来看，模型组及金双歧组Shannon指数较空白组升高(P<0.05)，凉血固元汤组低于模型组(P<0.05)。门水平各组菌群丰度比较可见，与空白组比较，模型组及金双歧组厚壁菌门相对丰度明显降低(P<0.01)，拟杆菌门显著升高(P<0.01)，厚壁菌门与拟杆菌门比例倒置，而凉血固元汤组厚壁菌门较模型组明显升高(P<0.01)，且拟杆菌门显著降低(P<0.01)。在属水平上，模型组和金双歧组拟杆菌属相对丰度较空白组升高(P<0.01，P<0.05)，凉血固元汤组低于模型组 (P<0.01)，且布劳特氏菌属较模型组升高(P<0.01)。结论 凉血固元汤能有效调节辐射导致的肠道菌群的结构失调和数量变化，改善大鼠生存质量。
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    Tim-3调控T细胞IL-2表达的机制研究
    李国贤,张军,窦帅杰,李葛,高扬,唐莉莉,侯春梅,马远方,韩根成
    2019, 43(6): 0-0.
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    目的 探究T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(T cell immunoglobulin and mucin- domain containing molecule-3，Tim-3)对白细胞介素-2(IL-2)的调控作用及机制。 方法 通过ELISA、FACS以及RT-PCR方法检测T细胞活化后，Jurkat高表达Tim-3(JurkatTim-3-high)与低表达Tim-3(JurkatTim-3-low)细胞系中IL-2的基因转录及蛋白表达水平；使用中和性抗人Tim-3抗体阻断Jurkat细胞系中Tim-3功能，ELISA及RT-PCR方法检测IL-2的蛋白分泌及转录水平变化；通过Western Blot蛋白免疫印迹法检测Tim-3对IL-2表达调控相关分子包括蛋白激酶PKCβ1及核因子-κB亚基P65的磷酸化的影响。 结果 ELISA、FACS和RT-PCR结果均表明Tim-3抑制IL-2的表达，使用抗人Tim-3抗体阻断后，IL-2的表达上调；Western Blot结果显示与JurkatTim-3-low细胞相比，JurkatTim-3-high细胞中蛋白激酶PKCβ1及核因子-κB亚基P65的磷酸化受到明显抑制。使用中和性抗人Tim-3抗体阻断后，PKCβ1及P65的磷酸化明显增强。 结论 Tim-3对IL-2的基因转录及蛋白表达起负性调控作用，并且可能是通过抑制核因子κB(NF-κB/p65)及蛋白激酶C (PKCβ1)的磷酸化，从而抑制IL-2的产生。
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    敲除GPS2基因对小鼠胚胎原始造血的影响
    WangXiaoHan
    2019, 43(6): 0-0.
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    目的 明确敲除GPS2基因对小鼠胚胎原始造血的影响。方法 分离GPS2敲除小鼠胚胎外周血细胞，利用瑞氏吉姆萨染色观察血细胞形态，利用流式细胞术分析原始红细胞分化情况；分离敲除小鼠卵黄囊细胞，利用集落形成实验分析造血分化能力，利用流式细胞术分析造血干细胞的产生。结果 GPS2敲除胚胎外周血部分原始红细胞细胞膜皱缩、形态畸形，未成熟原始红细胞（CD71+Ter119-）比例明显提高。GPS2敲除与野生型卵黄囊中造血干细胞比例基本相同，产生CFU-E、BFU-E、CFU-GM及CFU-GEMM等集落的数量无明显差别。结论 敲除GPS2不影响卵黄囊造血干细胞产生及集落形成，但抑制原始红细胞的分化成熟并导致原始红细胞形态畸形。
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    乳腺癌化疗病人癌因性疲乏、体力活动与生活质量的研究
    王岩,李佳怡,王丹,常程,杨萍
    2019, 43(6): 0-0.
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    目的 调查乳腺癌化疗病人的癌因性疲乏、体力活动及生活质量状况，并分析三者之间的关系。方法 采用CFS、IPAQ-SV、FACT-B及自设的一般资料调查问卷对北京市某三甲医院213名乳腺癌化疗病人进行了调查。结果 本组乳腺癌化疗病人FACT-B各维度的得分为生理状况18.83±5.23，社会家庭状况19.52±5.95，情感状况16.68±4.99，功能状况14.17±6.29，附加关注23.36±5.36；CFS中躯体疲乏的得分为10.18±5.48，情感疲乏得分为7.29±3.39，认知疲乏得分为6.06±3.36；乳腺癌化疗病人近1周体力活动处于低水平组的有57人（26.8%），中水平组的有120人（56.3%），高水平组的有36（16.9%）。多元逐步回归分析发现年龄、医疗费用负担、躯体疲乏、情感疲乏、认知疲乏及体力活动分组与生活质量总分及各维度得分相关（P<0.05）。结论 乳腺癌化疗病人的生活质量处于中等偏低的水平，尤其是情感状况和功能状况，减轻疲乏、增加体力活动有助于改善其生活质量状况。
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    人体肺腺泡区多肺泡模型的建立和重力方向对颗粒物沉积影响的数值模拟研究
    lipenghui
    2019, 43(6): 0-0.
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    目的 针对现行人体肺腺泡模型与实际差异过大问题，建立更加符合实际的人体肺腺泡模型并采用该模型数值模拟研究重力方向对人体肺腺泡区颗粒物沉积的影响。方法 采用Inventor 2016建立人体肺腺泡模型，采用fluent 15.0数值模拟重力方向的影响。结果 建立的“柱状气管+球状肺泡”架构多肺泡模型各项数据与文献一致；重力方向对颗粒物在肺腺泡区总体沉积率影响不大，但会显著影响颗粒物沉积位置。结论 建立的“柱状气管+球状肺泡”架构的多肺泡模型能满足不同研究对模型的需要，重力方向是影响颗粒物沉积的重要因素。
    • 实验研究
  • 实验研究
    小鼠抗人LSECtin单克隆抗体的制备与鉴定
    Peng贵林Guilin
    2019, 43(6): 0-0.
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    目的：制备并鉴定小鼠抗人LSECtin（肝、淋巴结窦内皮细胞凝集素）单克隆抗体，为深入研究LSECtin的功能奠定基础。 方法：利用CHO细胞制备人LSECtin-His融合蛋白，将其作为抗原免疫Balb/c小鼠，通过电融合获得能产生人LSECtin单克隆抗体的杂交瘤细胞。用LSECtin重组蛋白作为检测原，筛选分泌LSECtin单克隆抗体的杂交瘤细胞株。分别通过流式检测和Western blot实验，对LSECtin单克隆抗体进行鉴定。 结果：获得分泌LSECtin单克隆抗体的杂交瘤细胞系。流式细胞术结果显示，共有5株抗体可特异性识别细胞表面表达的LSECtin；有2株可用于Western blot实验。 结论：获得能够应用于流式细胞术和Western blot实验的LSECtin单克隆抗体，为LSECtin的功能性研究奠定了基础。 【关键词】LSECtin；杂交瘤细胞；单克隆抗体
    • 综述
  • 综述
    衣被蛋白复合物II在RNA病毒增殖过程中的作用
    杨伟伟洪
    2019, 43(6): 0-0.
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    细胞内膜系统在病毒蛋白及病毒颗粒合成、组装以及释放过程中发挥着重要作用。衣被蛋白复合物II（COPⅡ）介导细胞内顺向运输，即负责从内质网到高尔基体的物质运输，多种RNA病毒会利用COPII通路和(或)COPII组分为其生命周期服务。本文就衣被蛋白复合物II（COPⅡ）在RNA病毒增殖过程中发挥的作用及其研究进展进行综述。
    • 临床观察
  • 临床观察
    MRI在乳腺癌新辅助化疗疗效评估中的价值
    王婷婷,周娟,吴霞,张少华,李日飞,戴应俊,盛复庚
    2019, 43(6): 0-0.
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    目的：探讨1.5T MRI量化参数在乳腺癌新辅助化疗(NAC)疗效评估中的应用价值。材料与方法：回顾性收集72例接受NAC的乳腺癌患者化疗前、4周期后的乳腺磁共振扩散加权成像及动态增强图像资料，以Miller＆Payne标准评估术后病理结果，并将其分为完全反应组和未完全反应组，比较组间病灶收缩率、表观扩散系数( ADC )及早期强化率的变化差异。结果：术后病理完全反应组40例，未完全反应组32例。NAC前组间病灶直径、ADC值及早期强化率均无差异( P > 0.05 )，化疗后完全反应组的病灶收缩率、ADC值及早期强化率的变化较未完全反应组明显( P < 0.01 )。以术后病理为标准，获得的受试者工作特征曲线下面积( AUC )分别为0.788、0.832与0.905，多参数联合获得的AUC为0.948。结论：MRI显示的病灶大小、ADC值及早期强化率的变化可一定程度上反映乳腺癌的最终化疗效果，MRI量化参数可为乳腺癌治疗方案的调整提供参考。
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    藤壶cp19k基因mRNA二级结构对其在大肠杆菌中表达的影响
    徐臻臻
    2019, 43(6): 0-0.
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    目的 探究藤壶cp19k基因5'端mRNA二级结构对其在大肠杆菌中表达的影响。方法 通过对3个藤壶物种的cp19k基因（balcp19k、mrcp19k、bicp19k）序列进行分析，并利用大肠杆菌密码子偏好性对其进行优化，将优化后的3个基因序列利用BioSun软件分析它们5'端和3'端的mRNA二级结构和自由能。利用大肠杆菌原核表达系统对3个基因进行表达，并通过SDS-PAGE观察蛋白表达情况。结果 3个基因的3'端mRNA二级结构和自由能差异不大；5'端mRNA二级结构相比，balcp19k的结构相对简单，自由能较高；mrcp19k和bicp19k二级结构较稳定，自由能较低。SDS-PAGE及Western blot结果显示，Balcp19k蛋白有表达，而Mrcp19k蛋白和Bicp19k蛋白无表达。结论 cp19k基因5'端mRNA二级结构的自由能低和二级结构稳定都不利于蛋白表达，此结果为藤壶cp19k的进一步研究奠定了基础，也为实现其他外源基因在原核系统中表达提供借鉴。
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    Vav1-Cre 介导的YFP报告小鼠有效标记多组织器官中的巨噬细胞
    李斯特
    2019, 43(6): 0-0.
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    【摘要】 目的： 利用Vav1-Cre介导的ROSA26RYFP小鼠产生黄色荧光蛋白的特性检测YFP在不同器官中巨噬细胞的标记效率。方法：通过基因型鉴定的方法筛选出Vav1Cre小鼠与ROSA26RYFP小鼠杂交产生的双阳性子代小鼠，利用流式细胞术检测肝、脾、肾和肺中巨噬细胞的标记效率。结果：Vav1Cre与ROSA26RYFP小鼠的杂交后代共19只，其中双阳性基因型小鼠（Vav1CreROSA26RYFP）9只；流式细胞术分析肝、脾、肾和肺中巨噬细胞YFP阳性细胞百分比（%）91.49±1.332，98.02±0.3023，94.01±0.8127，91.39±1.47。结论：Vav1CreROSA26RYFP小鼠能够高效标记各组织器官中的巨噬细胞。
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    2例移植肾并发感染性假性动脉瘤的观察与护理
    侯艳艳
    2019, 43(6): 0-0.
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    移植肾感染性假性动脉瘤是肾移植术后严重而罕见的血管并发症之一，在肾移植术后的人群中发生率为0.09%【1】。假性动脉瘤形成后，不能自行愈合且感染性病灶更易破裂出血，一旦破裂出血，危及患者生命。此类患者应引起重视，争取早日诊断和及时治疗，其诊疗过程中，临床护理配合是不可或缺的一部分。中国人民解放军总医院第一医学中心自2014年2月至今共收治2例肾移植术后并发感染性假性动脉瘤患者，现将临床特征、诊治过程及护理体会总结如下。
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