军事医学

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1例口服布洛芬后饮酒致酒精中毒伴双硫仑样反应的救治与护理

韩丽梅

2019, 43(12): 0-0.

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总结1例口服肩周炎药物后饮酒致酒精中毒伴双硫仑样反应治疗及护理经验，通过急诊救护、常规护理、严密的病情观察及心理护理，患者于入院第2日复查结果无异常，顺利出院。为今后临床救治及护理提供借鉴。

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加强直升机医学救护体系建设的思考

董薇

2019, 43(12): 0-0.

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直升机医学救护是指使用直升机在具有急救和医疗监护条件下进行的伤病员救治与后送的空中运输活动。本文论述了直升机医学救护的主要优势、介绍了我国直升机医学救护体系建设概况，并对中国直升机医学救护体系建设思路进行了展望。

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实验研究

双醛功能化聚乙二醇交联乙二醇壳聚糖复合丝素作为一种新型可注射细胞治疗用水凝胶载体的可行性初步研究

王丽

2019, 43(12): 0-0.

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目的制备并评估一种双醛功能化聚乙二醇（difunctionalized polyethylene glycol, DF-PEG）交联乙二醇壳聚糖(glycol chitosan, GCS)复合丝素（Silk fibroin, SF）作为一种新型可注射细胞治疗水凝胶载体的可行性。方法室温下将DF-PEG作为交联剂与SF/GCS配比为2：3的水溶液进行混合，60s内迅速形成SF/GCS/DF-PEG水凝胶。通过扫描电镜、傅里叶红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy, FT-IR)、X射线衍射(X-ray diffraction, XRD)以及自愈性实验和可注射性实验对SF/GCS/DF-PEG水凝胶的结构和理化特性进行表征。接种小鼠成骨前体细胞(mouse osteoblast progenitor cells, mOPCs）对水凝胶材料的细胞毒性、生物相容性以及可注射性进行评价。结果 SF/GCS/DF-PEG水凝胶孔隙大小一致、形态规则、孔隙间具有良好的连通性且孔壁厚度均匀、表面光滑。FT-IR及XRD结果表明凝胶各组分化学基团间发生了相互作用，并伴有结晶状态的改变。包封于水凝胶中的mOPCs存活和增殖状态良好，经配有21号注射针头的注射器注射后，0.5h与24h时细胞存活率仍在80%以上，可以耐受水凝胶的包封、注射以及自愈过程。结论成功地制备了可注射的自愈性SF/GCS/DF-PEG水凝胶，该水凝胶综合性能优异，有望成为新型可注射型细胞治疗载体。

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实验研究

小鼠社交挫败应激模型的建立及评价研究

常欣

2019, 43(12): 0-0.

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构建稳定可靠的应激致抑郁与认知功能损害的啮齿类动物模型，对于解析应激反应的神经生理学机制具有重要研究意义。在本研究中，通过优化慢性社会挫败应激模型构建方法，并结合社交互动等行为学评价，成功筛选到较高比例的应激敏感型抑郁小鼠模型。研究还发现，抑郁模型小鼠伴随有明显的体重下降、血糖升高等生理指标改变以及空间记忆等认知功能的下降。本研究为探讨应激致抑郁的神经机制以及发掘抑郁相关新靶点奠定了实验基础。

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肝脏细胞外基质促进人胚胎干细胞肝向诱导分化的实验研究

孙旭尔,颜洁心,余群芳,李瑞红,柳娟,王韫芳

2019, 43(12): 0-0.

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[摘要] 目的探究大鼠肝脏脱细胞获得的细胞外基质对人胚胎干细胞肝向分化的影响。方法运用“四步法”对大鼠肝脏进行脱细胞化处理并评估脱细胞效果；将其粉末化处理后作为培养基底成分添加于人胚胎干细胞肝向诱导分化过程中，以商品化基质胶Matrigel为对照，通过检测各阶段谱系标记物、肝细胞成熟标志物等指标评估其对人胚胎干细胞肝向分化的影响。结果 “四步法”能够获得高质量的大鼠脱细胞肝脏支架。其应用可加快人胚胎干细胞肝向分化进程，增强肝样细胞的合成、分泌、代谢功能。结论大鼠肝脏脱细胞获得的细胞外基质能够促进人胚胎干细胞肝向分化，提高肝样细胞功能。

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B型肉毒毒素单克隆抗体的制备和鉴定

AnJian

2019, 43(12): 0-0.

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[摘要]　目的　利用杂交瘤技术筛选抗B型肉毒毒素（BoNT/B）的鼠源单克隆抗体（mAb）。方法　以BoNT/BHc蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，取小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合，筛选阳性细胞株经有限稀释法克隆化后，采用腹水诱生的方法制备抗体，通过亚型鉴定、SDS-PAGE、Western印迹以及非竞争ELISA等方法对抗体进行鉴定。结果　免疫后5只小鼠尾血效价均达到1:64000，取其中效价最高的5号鼠制备杂交瘤，筛选到9株阳性细胞，亚型鉴定确定抗体重链有IgG1和IgG2b两种亚型，轻链均为κ型。腹水制备的1E9-H2抗体纯度大于96%，以线性表位与抗原BoNT/BHc特异性结合，亲和力常数为6.7×10-9 mol/L。结论　筛选到一株高亲和力鼠源单克隆抗体，为BoNT/B中和抗体研发及检测方法建立提供了选择。

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脱氧胆酸诱导小鼠肠上皮细胞MCP-1表达的作用及机制研究

王岭玉

2019, 43(12): 0-0.

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[摘要]：目的：研究脱氧胆酸（DCA）对肠上皮细胞趋化因子MCP-1表达的诱导作用及机制。方法：以不同浓度DCA刺激小鼠肠上皮细胞，荧光定量PCR和ELISA法分别检测细胞MCP-1 mRNA、蛋白表达水平；利用siRNA技术或受体拮抗剂抑制相关胆汁酸受体，荧光定量PCR检测对DCA诱导MCP-1表达的影响；进一步分别阻断NF-κB和MAPKs信号传导通路，检测其对DCA诱导MCP-1表达的影响，并通过蛋白印迹技术验证DCA对肠上皮细胞NF-κB、MAPKs相关信号通路的活化作用。结果：DCA可剂量依赖性地诱导小鼠肠上皮细胞表达MCP-1，该作用主要由胆汁酸受体M2-mAchR介导；特异性的NF-κB、JNK或ERK抑制剂可明显抑制DCA诱导的MCP-1表达（P<0.001），同时DCA处理肠上皮细胞可显著上调ERK1/2、JNK和IκB的磷酸化水平。结论：高水平DCA可诱导肠上皮细胞产生MCP-1，这可能是其引起肠道巨噬细胞浸润、促进肠道炎症反应的重要作用机制之一。

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KRAB 型锌指蛋白Apak促进肿瘤的发展

郑骑坚,田春艳

2019, 43(12): 0-0.

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摘要］目的对Apak与肿瘤相关性进行研究，并初步探讨其中作用机制。方法利用Apak慢病毒过表达和敲低载体，构建Apak稳定过表达和敲低细胞系；Western印迹检测Apak表达水平；分别通过细胞增殖实验、克隆形成实验和裸鼠成瘤实验检测Apak对结肠癌细胞增殖、克隆形成及皮下成瘤能力的影响。利用Kaplan Meier plotter数据库，分析不同Apak表达状态下肿瘤总生存期的差异。结果建立Apak稳定过表达和敲低细胞系；在HCT116 p53+/+细胞中，Apak过表达促进，敲低抑制细胞增殖、克隆形成及裸鼠皮下成瘤能力；Apak过表达对HCT116 p53-/-细胞增殖及克隆形成无明显影响。在4种肿瘤类型中，Apak低表达组中位总生存时间高于高表达组，差异有统计学意义。结论 Aapk依赖对p53的调控促进肿瘤的发展。

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人类基因组中常见变异与罕见变异分布模式差异研究

李磊

2019, 43(12): 0-0.

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［摘要］目的探讨人类遗传变异中常见变异和罕见变异在基因组功能区域和基因区域的分布模式的差异。方法根据国际千人基因组计划（1000 Genomes Project）计算得到的次要等位基因频率把基因组变异位点分为常见变异和罕见变异；分析常见变异和罕见变异在染色体、种族及基因组功能区域中的整体分布特征；分析致病性、性状相关和表达调控型三类功能性变异位点中常见变异和罕见变异在基因组功能区域的分布差异；分析常见变异和罕见变异在基因区域分布密度的差异，并对密度分布排名前500位和后500位的基因进行功能富集分析。结果常见变异和罕见变异在基因组功能区域的分布特点基本一致，在基因组非编码区（内含子区和基因间区）分布最多。与基因组功能变异整体分布不同，致病性变异中常见变异和罕见变异在基因组功能区域的分布模式差异显著（χ² = 2 503.74, P < 0.001），罕见变异在外显子区和剪接位点处频率较高，常见变异在非编码区频率较高。性状相关和表达调控型变异中常见变异和罕见变异在基因组功能区域上的分布比较类似，其中常见变异在编码区和非编码区的比例均高于罕见变异。此外，常见变异和罕见变异在基因区域的密度分布模式也不相同。结论在致病性、性状相关和表达调控型三类功能性变异位点中，常见变异和罕见变异在基因组功能区域和基因区域的分布模式均不相同。

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实验研究

肿瘤蛋白D52的原核表达及单克隆抗体的制备

王龙珠

2019, 43(12): 0-0.

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目的：重组表达及纯化人肿瘤蛋白D52（TPD52）蛋白，制备其单克隆抗体。方法：利用PCR方法将pFlag-CMV2-Tpd52质粒中的Tpd52全长基因序列扩增，通过酶切、连接插入到表达载体pET-28a（+）中，构建重组质粒pET-28a-Tpd52，用IPTG诱导目的基因在E.coli中表达。表达的TPD52蛋白经过纯化后作为抗原免疫小鼠，提取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞（SP20）进行融合生成杂交瘤细胞，ELISA方法筛选出能分泌TPD52抗体的杂交瘤细胞，Western Blot（WB）方法筛选出抗体特异性较好的杂交瘤细胞，再经有限稀释法分选出单克隆细胞株并用WB实验鉴定抗体特异性，用抗体特异性较好的单克隆杂交瘤细胞株进行腹水抗体制备，用ELISA方法检测腹水抗体的效价及亚型，通过WB实验比较制备获得的抗体与商品化抗体并且检测在不同细胞系中TPD52蛋白的表达情况。结果：重组质粒经测序确定插入Tpd52目的基因；SDS-PAGE实验分析表明IPTG诱导6 h后在E.coli中表达了大量TPD52融合蛋白；ELISA结果表明获得了阳性的融合细胞，WB实验确定多克隆抗体和单克隆抗体均能与TPD52蛋白发生特异性反应。ELISA和WB结果表明获得了高效价的TPD52腹水抗体。结论：重组质粒pET-28a-Tpd52在E.coli中高效表达，成功制备了特异性和灵敏度高的TPD52蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体。

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实验研究

STAT1-CXCL9-10信号通路调控间充质干细胞免疫抑制作用的实验研究

周斌

2019, 43(12): 0-0.

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摘要：目的：探究间充质干细胞（Mesenchymal stem cells, MSCs）在炎症微环境下，通过STAT1-CXCL9-10信号通路发挥免疫抑制作用的机制研究。方法：分离并培养小鼠骨实质来源MSCs，采用流式细胞术结合诱导分化等方法检测MSCs自身生物学特性；炎症因子TNF-α、IFN-γ刺激MSCs,实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测趋化因子CXCL9、CXCL10表达； Western blot检测STAT1及p-STAT1表达；进一步，RT-PCR检测转染siRNA-STAT1后MSCs在炎症因子TNF-α、IFN-γ刺激下STAT1、CXCL9及CXCL10 的mRNA表达量；Western blot检测STAT1及p-STAT1蛋白表达量。结果：分离培养的MSCs呈成纤维样，涡旋状贴壁生长，高表达CD29、Sca-1和CD90，不表达或低表达CD11b、CD31、CD34、CD45和MHCⅡ；诱导分化结果显示，细胞出现大量脂滴，碱性磷酸酶活性显著增加；成脂关键转录因子CEBPα和PPARγ和成骨关键转录因子骨钙素和Runx2表达显著增加（P<0.001）；炎症因子TNF-α、IFN-γ刺激后MSCs中CXCL9、CXCL10、STAT1及p-STAT1表达量均显著增加（P<0.001）。采用siRNA敲低MSCs中STAT1表达后，在同样的炎症因子刺激下CXCL9、CXCL10、STAT1及p-STAT1表达量均显著降低（P<0.001）。结论：MSCs在炎症微环境（TNF-α、IFN-γ）中，通过高表达STAT1促使趋化因子CXCL9及CXCL10的高表达，进而影响MSC的免疫抑制作用。

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组学数据分析

部队高发精神疾病发生机制相关基因内在性质的系统解析

DongYang

2019, 43(12): 0-0.

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目的：全面解析精神分裂症 (Schizophrenia, SCZ)、双向情感障碍 (bipolar disorder, BD) 及自闭症 (autism disorder, ASD) 等三种部队高发精神疾病已知相关分子的内在性质，挖掘新的相关分子及其在发病机制中的作用。方法：利用基于超几何分布的富集缺失分析方法确定三种精神疾病已知相关分子的五大类内在性质特征，基于分析结果量化每种基因参与精神疾病发生的可能性，结合差异表达信息，筛选新的潜在相关分子。结果：三种精神疾病已知相关分子倾向于复杂、无序、高连接度，进化上倾向于是次古老基因、进化较慢，功能上倾向参与神经发育、突触传导等生物学过程；共筛选到559种新的潜在相关分子。结论：该研究全面解析了三种精神疾病相关分子的内在性质，并通过新的相关分子筛选对其发病机制的深入研究提供了重要参考信息。

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葡萄糖转运体基因GLUT12表达载体的构建及其对乳腺癌细胞葡萄糖摄取的影响

施亚娇

2019, 43(12): 0-0.

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[摘要] 目的从乳腺癌文库中钓取GLUT12全长编码序列，克隆至pCMV-Myc中，并在293T细胞中实现其真核表达，检测其对乳腺癌细胞葡萄糖摄取功能的影响。方法利用PCR从乳腺文库中获得GLUT12编码区全长序列，将其以正确相位与pCMV-Myc载体中的Myc编码序列融合，将重组质粒转化E.coli DH5α后，通过限制性内切酶酶切和DNA测序等方法对重组质粒进行鉴定。将该重组质粒转染293T细胞，利用Western印迹法检测pCMV-Myc-GLUT12重组质粒的表达。在此基础上，检测GLUT12对乳腺癌细胞葡萄糖摄取功能的影响。结果构建了GLUT12真核表达载体，经过酶切电泳和DNA测序，鉴定出插入序列正确的GLUT12表达载体，在真核细胞内实现其真核表达，表达产物能促进乳腺癌细胞对葡萄糖的摄取。结论成功构建了GLUT12真核表达载体，在真核细胞中成功表达，表达产物具有生物学活性。 [关键词] GLUT12；真核表达；乳腺癌；葡萄糖摄取

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