本期目录

• 2018年, 第42卷, 第7期
  刊出日期：2018-07-25

    

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  利用丙氨酸突变探究PSMα4结构与功能的关系

  赵成娜

  2018, 42(7): 0-0.

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  [摘要]：目的 丙氨酸扫描定点突变探究金黄色葡萄球菌PSMα4结构与其功能之间的关系。 方法 利用人工合成将多肽PSMα4中的非丙氨酸残基进行丙氨酸扫描定点突变，比色法OD540测溶血活性，LDH试剂盒测HCMEC/D3细胞和PMN裂解程度，圆二色性(CD)检测以比较其结构上的改变，最后利用同源模拟初步预测了PSMα4的三维立体结构。 结果与结论 首先，鉴定到了与PSMα4细胞毒作用密切相关的位点，结合CD的结果发现，PSMα4的细胞毒作用与其α螺旋程度呈正相关；其次，鉴定到了与PSMα4趋化作用密切相关的位点。
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  低温血液冻存、运输箱研制

  刘敏霞

  2018, 42(7): 0-0.

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  [摘要]　目的 血液冻存运输设备的使用对贮备成分血、调节供求平衡、稀有血型输血和战备贮血及特殊情况下的转移运输有重要意义。方法 研制了一台采用深冷混合工质节流制冷机作为冷源、容积为60 L的低温速冻箱和配套的相变材料运血箱。运血箱由填充相变介质HFC-4310mee的不锈钢封装盒和保温箱组成，内部有效容积约为10 L。结果 速冻箱箱内温度从常温降至-80℃的空载降温时间约70 min；箱内极限温度可到-128℃，降温时间约180 min；负载时约600 min降到-125 ℃。当运血箱内容纳-80℃的15袋500 mL血液以及-110 ℃左右的封装盒时，箱内温度保持在-65 ℃以下的时间可达到10 h。结论 本文研制的低温速冻箱可实现血液的冻存，同时配套使用的相变材料运血箱可实现低温血液的短途短时便携运输。
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  军事战伤后致严重压疮采取集束化护理管理体会

  jiangjin

  2018, 42(7): 0-0.

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  现代军事战争以军事技术、武器装备和信息化程度的高科技含量以及诸兵种联合作战为特征，而且存在武器杀伤威力大、作用时间长、杀伤机制复杂等特点，因此其致残、致死率高[1]。相对一部分伤员经过积极救治后，即使存活也面临长期卧床的可能，其压疮不可避免。压疮大大降低这些伤员的生活质量，严重时可继发感染引起败血症甚至危及生命[2]。本文通过对在我院收治的一例军事战伤后长期卧床的压疮患者采取集束化护理干预治疗的压疮护理措施，取得满意效果
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  基于虚拟现实技术的空间认知能力实验方法研究

  王宏伟

  2018, 42(7): 0-0.

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  视觉空间认知能力可作为飞行学员评估预测飞行能力的重要参考指标，基于虚拟现实技术的视觉空间能力实验方法可以改善现行实验方法逐渐暴露出的问题。本文针对视觉空间能力实验的研究现状及存在问题，探讨虚拟现实技术实验手段，分析虚拟地理环境的空间认知特征，重点论述设计视觉空间能力虚拟实验构想、实施步骤，研究阐述实验方法的局限性及待证实的问题。
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  实验研究

  Tim-3对巨噬细胞葡萄糖转运体的调节机制研究

  zhangjiacheng

  2018, 42(7): 0-0.

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  [摘要] 目的 探讨T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域分子-3（T cell immunoglobulin and mucin-domain containing molecule-3，Tim-3）对巨噬细胞葡萄糖转运体（Glucose Transporter 1， GLUT1）的表达及其对细胞功能的影响，并初步探索其影响机制。方法 分别使用Tim-3融合蛋白、Tim-3激动抗体，阻断和激活鼠源巨噬细胞系Raw264.7，在基因水平观察GLUT1、GAPDH以及TNF-α的变化，在蛋白水平观察GLUT1、TNF-α的变化。结果 激活、抑制巨噬细胞Tim-3能分别抑制和促进GLUT1、TNF-α的基因和蛋白表达以及GAPDH的基因表达。结论 Tim-3负调控巨噬细胞GLUT1的表达，进一步影响TNF-α的分泌，参与TNF-α转录后调控的GAPDH可能参与其中的调节机制。
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  实验研究

  田鼠型鼠疫菌血液存活能力下降导致了其对豚鼠低毒

  纪宇欣,周亚洲,李璐,杨瑞馥,王效义

  2018, 42(7): 0-0.

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  目的 探讨为什么布氏田鼠型鼠疫菌对小鼠强毒而对豚鼠低毒的原因。方法 通过将布氏田鼠型鼠疫菌201菌株分别与豚鼠和小鼠抗凝液共孵育，然后用稀释平板计数法测定其在两种动物全血中的存活能力；通过与两种活性血清和两种56 °C灭活补体血清共孵育，分别测定了鼠疫菌在活性血清和补体失活血清中的存活能力。结果 田鼠型鼠疫菌在小鼠全血、活性血清和灭活补体血清中的存活能力明显高于在豚鼠全血、活性血清和灭活补体血清中的存活能力。在小鼠和豚鼠血清中鼠疫菌存活能力明显高于在两种动物补体灭活血清中的存活能力。结论 布氏田鼠型鼠疫菌在豚鼠血液中的存活能力下降导致了其对豚鼠低毒。在同一种动物血清中，灭活补体不仅不能使鼠疫菌血清存活能力提高反而使血清存活能力降低。
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  SDF-1α对MSCs迁移能力及其信号轴的影响

  NINGYu

  2018, 42(7): 0-0.

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  目的：利用基质细胞衍生因子-1（SDF-1α）腺病毒载体，观察其对骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)体外迁移能力及迁移信号轴HIF-1α/VEGF/SDF-1α/CRCX4的影响。方法：将前期构建的腺病毒Ad-SDF-1α，阴性对照腺病毒Ad-GFP及CXCR4抑制剂AMD3100转染MSCs。观察Ad-SDF-1α的转染效果，Transwell小室检测处理后MSCs的迁移能力，QPCR检测各组MSCs HIF-1α/VEGF/CRCX4的mRNA表达，Western bloting检测各组HIF-1α/CRCX4的蛋白表达，ELISA检测各组培养基上清VEGF表达水平。结果：Ad-SDF-1α转染效果良好；Ad-SDF-1α组细胞迁移数量较其他组多（P<0.05），并且Ad-SDF-1α组与Ad-SDF-1α+AMD3100组的细胞数量均较空白组多（P<0.05），抑制剂AMD3100组细胞数量明显低于其他各组（P<0.05）；Ad-SDF-1α组及Ad-SDF-1α+AMD3100组的HIF-1α、VEGF及CXCR4 mRNA及蛋白表达水平显著高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)；而Ad-SDF-1α+AMD3100组的HIF-1α、VEGF及CXCR4 mRNA及蛋白表达水平表达水平较Ad-SDF-1α组低，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：Ad-SDF-1α提高了MSCs的体外迁移能力，同时SDF-1α基因能够促进HIF-1α、VEGF及CRCX4表达，因此MSCs迁移能力的提高是通过HIF-1α/VEGF/SDF-1α/CRCX4信号轴实现的。
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  军医大学战术战伤救治演练与考核的实践与思考

  龙希莎

  2018, 42(7): 0-0.

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  战术战伤救治是美军制定并投入实战的先进创伤管理指南，是实战化背景下，新型军事卫勤人员必须了解和掌握的战创伤处理原则和方法。海军军医大学聚焦我军医护人员战伤救治能力培养需要，举办战术战伤救治演练与考核。考核聚焦实战，围绕战术战伤救治理念进行科目设置，以培养和检验学员实战救护综合能力。本文介绍了此次考核的组训流程及科目设置、总结特点、分析存在问题并结合实践探讨经验。
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  pcDNA3.0-Flag-TFIIF真核表达载体构建及对喉癌细胞的影响

  wuyageng

  2018, 42(7): 0-0.

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  [摘要]目的：构建带Flag标签pcDNA3.0载体的通用转录因子IIF（TFIIF）的真核表达载体, 并检测该基因对喉癌Hep-2细胞增殖影响。方法：应用PCR技术以人乳腺文库为模板扩增出该基因的CDS区编码序列，利用双酶切技术将其连接到带Flag标签pcDNA3.0载体上，提取质粒进行测序，待测序正确后分别将pcDNA3.0-Flag空载体和pcDNA3.0-Flag-TFIIF转染喉癌Hep-2细胞并做Western blot表达鉴定，qRT-PCR检测该基因mRNA转录水平，应用CCK-8法、克隆形成实验检测其对喉癌Hep-2细胞生长的影响。结果：成功构建pcDNA3.0-Flag-TFIIF真核表达载体，并将其瞬时转染喉癌Hep-2细胞，应用Western blot技术检测该基因蛋白在Hep-2细胞中表达；提取总RNA通过qRT-PCR技术检测到该基因在喉癌Hep-2细胞转录水平明显增高；CCK-8法和克隆形成实验验证pcDNA3.0-Flag-TFIIF转染的喉癌Hep-2细胞生长受抑。结论：成功构建pcDNA3.0-Flag-TFIIF真核表达载体并证明其可抑制喉癌细胞生长，为进一步研究该基因在喉癌疾病中发生发展的作用奠定了基础。
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  Anti-IHFB单克隆抗体对铜绿假单胞菌生物被膜形成影响

  niujiali

  2018, 42(7): 0-0.

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  [摘要] 目的 探讨靶向铜绿假单胞菌IHFB蛋白的单克隆抗体对细菌生物被膜形成的影响。方法 以铜绿假单胞菌PAO1基因组作为模板，利用PCR技术扩增IHFB基因，进一步构建重组表达载体pET28a-IHFB，并转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，通过IPTG诱导表达IHFB蛋白，经Ni2+亲和树脂纯化获得IHFB蛋白；利用噬菌体抗体库技术，筛选获得与IHFB蛋白特异性结合的全人源单克隆抗体，PCR扩增所获得抗体的重链VH和轻链VL基因并构建重组表达载体，继而转染至293E细胞中，收集胞外分泌蛋白，并利用ProteinA树脂纯化单克隆抗体。利用ELISA实验检测抗体亲和力，利用铜绿假单胞菌生物被膜形成实验检测抗体活性。结果 通过噬菌体展示技术筛选并获得了全人源抗IHFB单克隆抗体，命名为YG15；ELISA结果表明YG15抗体与IHFB蛋白有较高亲和力（EC50=24.8ng/ml），进一步的实验结果证实YG15抗体影响铜绿假单胞菌生物被膜的形成。结论 全人源单克隆抗体YG15抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成。 [关键词] 铜绿假单胞菌；IHFB蛋白；单克隆抗体；生物被膜
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  大肠杆菌htrA突变株构建及其在鼠疫拟菌颗粒疫苗制备中的应用

  李璐

  2018, 42(7): 0-0.

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  目的 基于乳酸乳球菌和鼠疫菌F1抗原，制备鼠疫拟菌颗粒疫苗。方法 基于-Red一步重组技术，构建BL-21大肠杆菌htrA基因缺失突变株；将鼠疫菌F1抗原基因和PA基因克隆到pET-28a(+)质粒中构建了F1-PA融合蛋白表达载体，将此载体分别导入到BL-21大肠杆菌野生株和其htrA基因缺失突变株中构建F1-PA融合蛋白表达菌株；SDS-PAGE电泳分析F1-PA蛋白表达情况；镍柱亲和层析纯化包涵体蛋白，梯度稀释透析法复性F1-PA蛋白；乳酸乳球菌经热酸处理制备拟菌颗粒；革兰氏染色和透射电镜分析拟菌颗粒的形态；拟菌颗粒分别与F1-PA融合蛋白或F1蛋白共孵育制备拟菌颗粒疫苗。结果 F1-PA蛋白在大肠杆菌野生株和htrA缺失突变株中均以包涵体形式表达。拟菌颗粒对F1-Pa融合蛋白的吸附能力明显高于对F1蛋白的吸附能力。F1-PA融合蛋白在大肠杆菌htrA突变株中的表达量明显高于在野生株中的表达量。结论 大肠杆菌htrA突变株用于表达F1-PA蛋白优于野生株。借助于肽聚糖锚钩蛋白，可将鼠疫菌F1抗原结合到乳酸乳球菌拟菌颗粒上制备鼠疫拟菌颗粒疫苗。
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  人PGK1基因真核表达载体的构建及其功能

  刘刘

  2018, 42(7): 0-0.

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  [摘 要]目的：构建带FLAG标签的人癌基因磷酸甘油酸激酶 (Phosphoglycerate kinase1，PGK1)的真核表达载体，并验证PGK1表达产物的生物学功能。方法：采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人PGK1基因，并将其克隆到真核载体pcDNA3.0-FLAG上，酶切鉴定和测序鉴定后，通过Western印迹检测其表达；将FLAG-PGK1载体转染乳腺癌细胞ZR75-1，利用乳酸试剂盒测定乳腺癌细胞外乳酸含量，并通过CCK8法测定乳腺癌细胞的生长。结果：从乳腺文库中，PCR扩增出约1260 bp的DNA片段，克隆到pcDNA3.0-FLAG载体上，测序结果与目的序列一致。Western印迹检测到目的基因表达，且位置正确。细胞外乳酸含量测定结果显示， FLAG-PGK1转染的乳腺癌细胞，其细胞外乳酸含量高于用空载体转染的细胞；细胞生长曲线结果显示，转染FLAG-PGK1的乳腺癌细胞生长较空载体生长快。结论：成功构建了FLAG-PGK1的真核表达载体，FLAG-PGK1的表达促进了乳腺癌细胞乳酸的生成和生长，为进一步研究PGK1在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。
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  倒吊笔根的化学成分研究

  chenxingxiang

  2018, 42(7): 0-0.

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  目的 研究倒吊笔根的化学成分。方法 采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、制备高效液相色谱及重结晶等方法进行分离纯化，通过波谱数据和理化性质进行结构解析、鉴定。MTT法检测化合物体外抗肿瘤活性。结果 从倒吊笔根75%乙醇提取物三氯甲烷部位中分离鉴定了16个化合物，分别鉴定为：Uracil（1），尿囊素（allantoin，2），喹唑啉-2，4（1H，3H）-二酮（2，4(1H，3H)-quinazolinedione，3），色胺酮（tryptanthrin，4），槲皮素（quercetin，5），染料木苷（genistin，6），Linarin（7）豆甾醇（3β-hydroxysitost-5-en-7-one，8），5，6α-epoxy-5α-stigmastan-3α-ol（9），5，6β-epoxy-5β-stigmastan-3β-ol（10），桦木酸（betulinic acid，11），桦木酮酸（betulonic acid，12），齐墩果酸（oleanolic acid，13），3β-乙酰基-12-烯-11-酮（3β-acetoxy-urs-12-ene-11-one，14），3β，23-dihydroxyolen-12-en-28-oic acid（15） N-（2′-Hydroxyeicoxyicosanoyl）-1，3，4-trihydroxy-2-aminoheptadec-5-ene（16）。化合物4对人乳癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株HepG2、人结肠癌细胞株HCT116、人宫颈癌细胞株HeLa的生长有一定的抑制作用，其IC50值分别为4.5 mg/L、6.9 mg/L、3.7 mg/L、4.3 mg/L。结论 化合物1-10，13，15，16为首次从该植物中分离得到。化合物4，11，12，13在体外具有抑制肿瘤细胞生长的活性。
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  辐射诱导树突状细胞促进Tregs分化及肺上皮间质转化

  孙泽文

  2018, 42(7): 0-0.

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  [摘要] 目的 探讨树突状细胞经60Co-γ射线照射后激活调节性T淋巴细胞（regulatory T cells，Tregs）的能力，以及在Tregs诱导的上皮间质转化（epithelium-to-mesenchyme transition ，EMT）中的作用。方法 免疫磁珠分选的小鼠CD4+CD25-常规T细胞（conventional T cells ，Tcons）与60Co-γ射线照射（6Gy）后的树突状细胞共培养，72h后流式检测CD4+CD25+Tregs细胞的比例。通过磁珠分选后的Tregs与小鼠肺上皮细胞系MLE-12共培养，共培养72h后取MLE-12细胞通过免疫荧光以及Western blot实验检测上皮标志蛋白以及间质标志表白的表达。结果 免疫磁珠法分选小鼠脾脏Tregs细胞比例在90%以上，效果良好；树突状细胞照后抗原提呈功能增强，能显著诱导Tcons细胞分化为Tregs细胞；Western blot以及免疫荧光实验同时证明Tregs细胞能明显促进肺上皮细胞发生上皮间质转化。结论 树突状细胞照射后能显著诱导Tregs细胞分化，并且Tregs细胞能明显诱导肺上皮细胞发生上皮间质转化。
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  实验研究

  我国军人心率变异性水平及变化规律分析

  谢方,赵云,马婧,王世达,王雪,钱令嘉

  2018, 42(7): 0-0.

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  [目的] 检测我国军人日常心率变异性（heart rate variability，HRV）水平，分析其变化规律和特征，为提高部队健康保障提供科学依据。[方法] 将256名基层官兵根据年龄分为3组，利用心率变异分析仪采集5min心电信号，分析比较HRV指标：全部正常RR间期标准差（standard deviation of all NN intervals，SDNN）、总功率（total Power，TP）、低频功率（low frequency，LF）、高频功率（high frequency，HF）、低频功率与高频功率的比值（LF/HF）。[结果] 经统计分析发现<20岁组与20~29岁组各指标的差异无统计学意义（P>0.05），而30~39岁组SNDD、TP显著降低，LF/HF升高（P<0.05）。进一步与非军事人群比较，结果显示<20岁组官兵的SDNN和LF/HF低于正常参考值（P<0.05）；而20~29岁组官兵SDNN、TP、LF、HF较参考值有不同程度的升高（P<0.05）；30~39岁组官兵LF高于参考值（P<0.01）。[结论] 通过本研究了解了我军基层官兵的HRV水平和变化规律，不同年龄段官兵的HRV特征各不相同，应建立更细致、更有针对性的健康保障措施。 [关键词] 心率变异性；SDNN；TP；军人；健康保障
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  实验研究

  冷暴露机体肢端血氧饱和度作为寒冷损伤预警生物学指标的探索研究

  王雪,王世达,张亮,赵云,马婧,田鹏,谢方,钱令嘉

  2018, 42(7): 0-0.

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  [目的] 探索肢端血氧饱和度作为寒冷环境应激损伤实时有效预警技术指标的可行性，维护寒区部队官兵作业能力。[方法] 利用环境模拟舱对大鼠施加1~ 3h -15°C的寒冷刺激，观测冷应激大鼠后肢内侧体表温度、血管NOS活性、肢端血氧饱和度的变化，Pearson相关系数分析肢端血氧饱和度与冷应激反应的相关性。[结果] 大鼠接受1~3h寒冷刺激后，后肢内侧体表温度、血管NOS活性及肢端血氧饱和度均明显下降，且肢端血氧饱和度与冷应激大鼠血管NOS活性、后肢内侧体表温度的变化密切相关。[结论] 冷应激过程中大鼠肢端血氧饱和度与后肢内侧体表温度和血管NOS活性高度相关，可作为冷应激损伤的预警标志，对肢端血氧饱和度的监测可为冷应激损伤提供一种实时预警途径。
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  创伤性脑外伤后抑郁研究进展

  郝杰

  2018, 42(7): 0-0.

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  抑郁是创伤性脑外伤（Traumatic brain injury，TBI）较为突出的一种并发症。大量研究表明TBI患者中抑郁的发生率要高于一般人群。无论TBI还是TBI后抑郁，都严重影响患者日常生活、降低患者生活质量、增加社会负担。目前关于TBI后高发抑郁的机制研究还不是很全面、明确，现对TBI后抑郁的流行病学特征、发病机制及治疗手段进行对比分析和综述。