军事医学

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实验研究

某驻训部队食堂即食食品菌落总数测定与分析

年庆功,剧志英,于瑞敏,孔雪梅,邓兵

2018, 42(4): 0-0.

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目的测定朱日和阅兵期间某驻训部队食堂留样食品菌落总数，评价食品安全水平，探索和建立野外驻训条件下进行食品菌落总数测定的方法。方法 2017年7月阅兵期间，采集某驻训部队食堂食品留样，使用菌落总数测试片和便携式恒温培养箱，测定食品的菌落总数。结果 60份食品中，菌落总数达到满意水平（小于103 cfu/g）的食品占40%，超标食品（大于105 cfu/g）占25%，。三餐之中，晚餐的菌落总数显著高于早餐。依据加工方式分类，生食食品的菌落总数最高。结论该食堂食品安全水平较低。应加强卫生监督，以降低食堂即食食品菌落总数；同时，禁食未经过热加工的食品。

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实验研究

TDCPP暴露对PC12细胞CaMK2及MAPK信号通路的影响

sunjingran

2018, 42(4): 0-0.

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[摘要]目的研究磷酸三（1,3-二氯-2-丙基）酯（TDCPP）暴露对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）[Ca2+]i稳态的影响以及其潜在毒性作用机制。方法建立PC12神经细胞体外培养模型，选用50 M的TDCPP分别暴露PC12细胞0-4d以及分别以0 M、5 M、15 M、25 M、50 M的TDCPP暴露PC12细胞4d，采用Fluo-3AM荧光探针法检测[Ca2+]i水平；采用Western blot法检测钙依赖/钙调蛋白激酶2（CaMK2）、促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路相关蛋白及其磷酸化水平的变化。结果 PC12细胞内[Ca2+]i稳态遭到破坏，随着暴露时间的延长，胞内[Ca2+]i水平呈增多的趋势（P0.01），且随着暴露剂量的增加胞内[Ca2+]i水平增多，呈明显剂量效应关系（P0.05）。CaMK2和MAPK通路蛋白磷酸化水平增加，且CaMK2蛋白的磷酸化呈现明显的时间和剂量效应（P0.01）；c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38蛋白的磷酸化水平变化趋势相似，呈现一定的时间和剂量效应，但细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）蛋白的磷酸化水平随暴露时间的延长无改变。结论 TDCPP的暴露可引起PC12细胞内[Ca2+]i超载，破坏其稳态；激活CaMK2，使其磷酸化增多；同时激活MAPK通路，从而造成PC12细胞生存率的降低，细胞凋亡率的增加。

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综述

我国菌种保藏机构概述及各国菌种保藏机构的特点分析

MaHaixia

2018, 42(4): 0-0.

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我国是世界上物种多样性最丰富的国家之一，其中丰富的微生物资源，在很多领域发挥着重要作用。微生物具有生命活力，每一代生存时间一般很短，容易在传代过程中发生变异甚至死亡。菌种保藏中心的任务是广泛收集各种有用的微生物菌种，选择最适宜的保藏方法，使微生物在保藏和传代的过程中免于变异、衰退、活力减弱及死亡的风险，保持菌种原有的生物学特性，达到保证研究、检验、交换和使用的目的。菌种的科学保藏和管理直接关系到微生物资源的保存和利用。本文对我国菌种保藏机构进行了概述并分析了各国菌种保藏机构的特点。

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实验研究

哈维氏弧菌抗体的制备及其在磁性免疫层析试纸条的应用

陈璐萍璐萍,李晓晖晓晖,宁喜斌,李环,袁静,卢瑛

2018, 42(4): 0-0.

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【摘要】目的建立快速检测哈维氏弧菌的免疫学方法。方法本研究以甲醛灭活的哈维氏弧菌菌体为免疫抗原，对新西兰大白兔进行免疫得到哈维氏弧菌多克隆抗体；将得到的哈维氏弧菌多抗用间接ELISA法与创伤弧菌、副溶血性弧菌等常见食源性病原菌进行特异性检测；将哈维氏弧菌的多抗与磁珠结合起来，并将多抗标记在磁珠上形成特异性磁纳米探针，再分别以哈维氏弧菌多克隆抗体和山羊抗兔IgG 作为检测线 T 线和质控线 C 线，初步实现了双抗体夹心模式的磁性免疫层析试纸条，并对磁珠偶联抗体添加量进行优化。结果经ELISA法检测，哈维氏弧菌多抗效价为1:80000；其特异性良好，即此多克隆抗体与不同致病类型的食源性致病菌无交叉反应；最佳偶联抗体添加量为 140 μg；半定量检测时间为 10 min，检测的准确性和灵敏度已达到最优，通过单纯的肉眼观察，可实现 5×104CFU/mL 哈维氏弧菌的检测。结论本研究成功制备高效价哈维氏弧菌多克隆抗体，并与纳米磁性材料进行了结合，为深入研究哈维氏弧菌的免疫原性与免疫学快速检测方法提供了基础。

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载壳聚糖微球PVASA水凝胶的制备及其在药物缓释中的应用

魏娟

2018, 42(4): 0-0.

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摘要目的：在水凝胶材料上负载壳聚糖微球，以达到更好的缓释效果，微球中包裹了生物因子，研究复合支架体系的缓释效果。方法：本实验通过在PVA/SA复合水凝胶中载入壳聚糖微球，研究复合支架中BSA的释放行为。分别通过乳液交联法制备了壳聚糖微球和冷冻—解冻循环法制备了5种比例的复合水凝胶，测定微球、水凝胶和原材料和红外光谱，用扫描电镜观察了微球的形貌和粒径和5种比例水凝胶和复合支架的形貌，检测了微球、水凝胶和复合支架的机械性能，研究了水凝胶的溶胀性，用紫外吸收法测定了微球的载药量和包封率，比较了微球、水凝胶和复合支架的体外降解行为等。结果：制备的壳聚糖微球表面光滑、粒径均匀，载药量在31.03%之间，包封率在46.77%之间；制得的复合水凝胶溶胀性好、机械性能良好、热差性能稳定，孔隙多、孔洞大小均匀，突释现象不明显、释药性更好、载药的复合支架在降解七天后释药量达到98%；结论：该复合支架材料有望作为软骨组织工程的药物缓释输送系统。

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壳聚糖季铵盐-PLGA包载SAK-HV纳米粒的初步评价

heshiming

2018, 42(4): 0-0.

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目的利用壳聚糖季铵盐-PLGA包载SAK-HV蛋白，克服口服给药的生化屏障。方法采用双乳剂法制备载SAK-HV/壳聚糖季铵盐-PLGA纳米粒(SAK-HV/ quaternized chitosan-PLGA NP)。以高速离心法测定纳米粒中药物的包封率和载药量。以激光纳米粒度分析仪测定纳米粒PDI，粒径和电位。利用荧光显微镜分析纳米粒形态。在模拟人工胃肠液中测定纳米粒的体外释放并应用SDS-PAGE分析从NP中提取的SAK-HV的结构完整性。结果所制备的SAK-HV/ quaternized chitosan-PLGA NP 包封率为(70.8±2.2)%，载药量为(1.1±0.02)%。PDI为0.375±0.107，粒径为40.793±0.890nm，电位为26.667±2.483mV。采用荧光显微镜观察其形态为球形，较完整均匀。在人工胃肠液中，4小时的释放量分别为(36.9±0.8)%，(44.1±0.7)%。 SDS-PAGE结果显示从纳米粒中萃取释放出来的SAK-HV，未发生蛋白质的不可逆聚集或断裂，具有良好的稳定性。结论我们构建的壳聚糖季铵盐-PLGA纳米粒具有作为口服递送SAK-HV蛋白的潜力，为后续口服给药实验研究奠定了基础。

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实验研究

人Cdc25B基因启动子报告基因载体的构建及转录活性分析

丁立新,赵现哲,姜晓燕,刘晓丹,周平坤,丁库克

2018, 42(4): 0-0.

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目的构建人Cdc25B基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-Cdc25B-promoter，并检测其转录活性。方法应用欧洲启动子在线数据库（EPD）获得人Cdc25B基因5’端非编码区处包含转录起始位点在内的-2000~+100的DNA序列。以正常人全血基因组DNA为模板，利用PCR扩增该序列，并插入到pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体上。通过设计不同引物，进一步构建系列缺失体，共获得7个不同长度启动子序列的报告基因载体。将其与内参质粒pRL-TK瞬时共转染Hela细胞，通过双荧光素酶报告基因活性测定实验检测不同缺失体的转录活性。结果构建的人Cdc25B基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-Cdc25B-promoter经酶切鉴定及测序结果比对完全正确，将其转染Hela细胞后，检测到荧光素酶高表达（p<0.05）。启动子系列缺失分析显示-160~-53片段包含基本核心启动子，与生物信息学的预测结果一致。结论成功构建了7个具有转录活性的人Cdc25B启动子缺失片段，为进一步将其用于抗肿瘤药物的筛选与评价奠定了基础。

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综述

微重力环境人体健康效应研究进展

孙永彦,张紫燕,张虹影,王亚红,唐超,蔡澎

2018, 42(4): 0-0.

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随着人类航天事业的发展，空间生命科学研究日新月异，特别是空间微重力环境带来的宇航员健康问题，是航天飞行中面临的巨大挑战之一。近年来，微重力环境下的健康效应研究迅速由发现病症现象转入机理研究阶段。本文综述了微重力环境对人体九大生理系统的健康效应研究进展，着重从病理症状到发病机制解析微重力环境对生理健康的影响。深入探讨微重力条件下生理系统的变化，对于保证航天员生命健康、保障空间安全飞行有着不可忽视的作用。同时也为认识重力的生物学效应提供理论依据。

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实验研究

KPC1对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响

周光明

2018, 42(4): 0-0.

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[摘要] 目的探讨Kip1泛素化促进复合体蛋白1（Kip1 Ubiquitination-Promoting Complex Protein 1，KPC1）对肝癌细胞系Bel-7402和SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响以及可能的分子机制。方法通过慢病毒包装的方法将KPC1过表达重组质粒转染进肝癌细胞系Bel-7402和SMMC-7721，筛选得到稳定过表达KPC1的肝癌细胞系；采用小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）瞬转敲低肝癌细胞系中的KPC1；采用蛋白免疫印迹法（Western Blotting，WB）检测肝癌细胞系中KPC1蛋白的表达水平，验证过表达和敲低KPC1的效果；采用Cell Counting Kit-8 （CCK-8）法检测KPC1对肝癌细胞系增殖能力的影响；采用Transwell法验证KPC1对肝癌细胞系迁移能力的影响；采用Log-rank检验比较KPC1高表达组和低表达组肝癌患者的生存期差异。结果过表达KPC1可显著抑制Bel-7402和SMMC-7721细胞的增殖和迁移能力；而敲低KPC1显著促进Bel-7402和SMMC-7721细胞的增殖和迁移能力。过表达KPC1抑制p105的表达水平、提升p50的表达水平；而敲低KPC1则促进p105的表达水平、抑制p50的表达水平。临床相关性分析显示KPC1在肝癌癌组织中下调表达，且与肝癌患者的不良预后显著相关。结论：KPC1通过抑制肝癌细胞系的增殖和迁移能力而发挥抑癌基因的功能。 [关键词] 肝癌；KPC1；细胞增殖；细胞迁移

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实验研究

ABRO1基因敲除小鼠骨髓来源巨噬细胞的永生化及其LPS/TLR4通路活化的检测

张煊宜

2018, 42(4): 0-0.

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目的永生化ABRO1基因敲除（knockout，KO）小鼠骨髓来源的巨噬细胞系（bone marrow-derived macrophages, BMDMs），并确定缺失ABRO1对巨噬细胞LPS/TLR4通路活化的影响。方法用pCDH-SV40LT-puro慢病毒分别感染野生型（wild type，WT）及ABRO1 KO小鼠的BMDM，连续传代培养50代以上，得到永生化细胞系。利用MTS法和EdU掺入法检测细胞增殖，Annexin V/7-AAD双染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡。脂多糖(LPS)刺激细胞后，Western blot检测NF-κB及MAPK信号通路，并用流式微球阵列（CBA）检测细胞产生IL-6、TNF-α的水平。结果成功构建了ABRO1 WT和KO的永生化BMDMs（immortalized BMDMs, iBMDM）。正常培养下，WT及KO iBMDM细胞增殖能力和细胞凋亡均无明显差别，但撤除血清后，KO iBMDM细胞凋亡明显高于WT。LPS刺激后，NF-κB、MAPK信号通路激活及IL-6、TNF-α的产生无明显差异。结论 ABRO1缺失不影响LPS/TLR4信号通路。敲除ABRO1促进血清撤除诱导的iBMDM凋亡。

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人GATA1真核表达载体的构建及对乳腺癌细胞生长的影响

刘刘

2018, 42(4): 0-0.

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目的：构建人GATA1基因的真核表达载体，研究其对乳腺癌细胞生长的影响。方法：以人乳腺文库为模板，采用PCR技术扩增出GATA1编码序列，将其插入到pcDNA3.0-FLAG载体中；将重组质粒与空载体分别转染293T细胞，Western印迹检测GATA1的表达情况，并通过生长曲线研究GATA1对乳腺癌细胞ZR75-1生长的影响，细胞划痕实验检测GATA1对细胞迁移的影响。结果：双酶切实验表明，pcDNA3.0-FLAG-GATA1的真核表达载体构建成功；Western印迹实验发现，GATA1在293T细胞中成功表达；生长曲线实验得出，GATA1可以促进乳腺癌细胞ZR75-1的生长，细胞划痕实验表明GATA1促进细胞迁移。结论：成功构建了pcDNA3.0-FLAG-GATA1的真核表达载体，并发现GATA1可以促进乳腺癌细胞ZR75-1的生长和迁移.

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采用IP-XL/MS技术研究SGC7901胃癌细胞中EGFR信号通路动态变化

JiShuhui

2018, 42(4): 0-0.

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目的研究胃癌细胞在EGF刺激下EGFR相互作用蛋白的时序性变化。方法筛选高表达EGFR的胃癌细胞系；在EGF刺激不同时间下，利用甲醛固定免疫沉淀联合质谱（IP-XL/MS）技术对胃癌细胞中EGFR相互作用蛋白表达谱进行无标定量，捕获EGFR网络的动态变化。结果与讨论在8种胃癌细胞系中，SGC7901细胞表达EGFR量最高。在四次生物学重复实验中，共鉴定到3728个蛋白，625个EGFR相互作用蛋白，包括已知的相互作用蛋白（GRB2、CBL、SHC1等），并发现59个新蛋白（ANKFY、LGR4、SNX3、VPS26A、ZFYVE20等）。ANOVA检验分析得到406个响应EGF刺激的差异表达蛋白，根据动力学变化可分成5个簇，其具有不同的生物功能，比如蛋白转运、內吞、囊泡循环和蛋白酶体运输等，共同参与EGFR信号传递的动态调控，交叉调节多条信号通路。

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细胞程序性坏死与心血管疾病研究进展

白玉婷

2018, 42(4): 0-0.

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随着对细胞死亡过程的深入研究，新的细胞死亡形式不断被人们发现。程序性坏死不同于被动坏死，是一种高度调节的细胞死亡形式。近年来不同类型的程序性坏死不断被报道，认为其在心肌梗死、缺血再灌注损伤、心力衰竭、心肌病等心血管疾病的发病机制中发挥重要作用，该文对其在心血管疾病中的作用及研究进展作一综述。

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60Co-γ辐照条件下硫酸阿托品的稳定性研究

陈明,郭奉洁

2018, 42(4): 0-0.

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摘要目的：探索不同因素（辐照剂量、初始浓度、N2/O2饱和及自由基清除剂等）对硫酸阿托品在60Co-γ辐照条件下的稳定性影响。方法：分别配制不同准确初始浓度的硫酸阿托品溶液（10 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、100 mg/L+N2饱和、100 mg/L+O2饱和、100 mg/L+10% L乙醇及硫酸阿托品粉末）等，经不同辐照剂量（0.3 KGy、0.6 KGy、1 KGy、2.5 KGy、5 KGy、10 KGy）的60Co-γ辐照后，利用HPLC测定溶液中剩余硫酸阿托品的含量。结果：（1）在相同辐照剂量下，初始浓度越大，稳定性越好；在相同初始浓度下，辐照剂量越大，稳定性越差。（2）N2/O2饱和并没有显著改善硫酸阿托品的稳定性。（3）添加自由基清除剂乙醇后，硫酸阿托品的稳定性显著提高。（4）粉末状态非常稳定，即使在10 KGy的辐照剂量下，降解不超过10%。结论：硫酸阿托品溶液对60Co-γ辐照敏感，为了在辐照环境下尽量保持硫酸阿托品稳定性，可以尝试将其制成粉末剂型。

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SERS-免疫层析的研究进展

Jiaxiaofei

2018, 42(4): 0-0.

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近年来，基于表面增强拉曼散射（surface-enhanced Raman scattering, SERS）的免疫层析检测新技术在分子诊断领域体现出了越来越重要的应用价值。SERS-免疫层析技术利用高灵敏和特异性的SERS检测探针代替传统的胶体金，克服了传统胶体金免疫层析技术在不可定量和灵敏度低的问题。本文从SERS-免疫层析的检测靶标，不同SERS检测探针的制备，SERS-免疫层析的灵敏度、特异性和重复性等几个方面进行综述其的应用与进展。

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东北地区3所空军青少年航空学校2015级学生医学选拔淘汰异常谱分析

姜涛

2018, 42(4): 0-0.

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[摘要]目的：分析东北地区3所空军青少年航空学校2015级学生分流体检和定选体检结果，为进一步探索青少年航空学校培养模式、提高定选合格率提供科学依据。方法：整理2018年度东北三省3所空军青少年航校学生定选体检数据和年度分流体检数据，对整体体检情况、淘汰科室分布和淘汰原因进行整理分析，并对入校3年来的远视力变化进行统计分析。结果：3所航校之间淘汰率的差异经分析无统计学意义（P＞0.05），3所航校之间学科淘汰的百分比构成之间的差异经分析没有统计学意义（P＞0.05）；12项淘汰异常项目中眼科占8项，共占淘汰异常项目的79.17%；黑龙江省学生配对视力差值的差异有统计学意义（P＜0.01），而吉林省和辽宁省差值的差异无统计学意义。结论：空军青少年航空学校要制定统一并切实可行的干预措施，进一步加强近视防控，有必要将玻璃体和角膜检测纳入常规分流体检检测项目。

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基底样乳腺癌预后标志物的基因表达谱分析

ZhangYuetao

2018, 42(4): 0-0.

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目的分析基底样乳腺癌术后组织样本的基因表达谱数据，筛选与预后相关的基因。方法从国际基因表达谱数据库GEO和EGA中检索并获取乳腺癌基因表达谱数据，按照PAM50分型得到基底样乳腺癌样本，保留记录有生存信息且基底样乳腺癌样本数量超过20个的数据集，最终保留了4个数据集，共447个基底样乳腺癌样本。采用Lipták's weighted meta-z检验分析基因与生存时间的关系，并对预后相关基因进行功能注释。结果通过分析，我们得到238个基因与基底样乳腺癌好预后有关，62个基因与基底样乳腺癌差预后有关（|meta Z score| < 3.09， P < 0.01）。基因功能注释发现好预后相关基因显著富集在免疫应答功能，而差预后相关基因没有显著富集的基因功能。结论分析得到的238个基因和62个基因分别与基底样乳腺癌的好预后和差预后有关，可能成为基底样乳腺癌新的预后标志物。

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