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    临床观察
  • 临床观察
    张威
    2018, 42(2): 0-0.
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    【摘要】目的 探讨不同种类有机磷农药的体内代谢,为制定重度有机磷农药中毒的中毒个体化血液净化方案提供依据。方法 收集2008年7月至2015年12月解放军第307医院急诊重症监护室(EICU)收治的80例急性重度口服有机磷农药中毒致呼吸衰竭患者的病例资料,按照口服有机磷农药的种类不同分成三组,即甲拌磷组(A组)、敌敌畏组(B组)及乐果组(C组),比较三组患者的昏迷时间、呼吸衰竭持续时间、住院时间、血清胆碱酯酶恢复时间及体内毒物浓度变化。结果A组患者的昏迷时间、呼吸衰竭持续时间、住院时间、血清胆碱酯酶上升至500U/L和1000U/L的时间明显长于其他两组患者(p<0.05),B组和C组之间比较无差异。体内毒物浓度监测显示,A组的血/尿毒物浓度比值最大达12.5,血液中毒物可持续10d以上,且与血清胆碱酯酶抑制存在相关性,而B组和C组患者的血/尿毒物浓度比值分别为1.0和0.7,在服毒后4-5d仅有个别患者血液中检测到极微量的毒物。结论 甲拌磷的经肾代谢能力明显弱于敌敌畏和乐果,重度中毒时体内代谢缓慢,可长时间抑制胆碱酯酶,病情恢复所需时间较长,需要反复行HP或联合CVVH以加速毒物清除,而敌敌畏和乐果体内代谢快,清除毒物以中毒早期为主。
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    张帅
    2018, 42(2): 0-0.
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    目的 研究具有数据录入、审核、存储、查询、统计分析等功能的战伤数据库系统,用于记录战伤发生、诊断、救治和转归等活动。方法 通过数据库的需求分析、设计,确定数据库管理系统的基本结构、功能,以Oracle11g为数据库管理系统,使用Java语言开发战伤数据库系统。结果 建立了基本信息、负伤信息、伤情信息、急救与救治信息、用药信息、手术信息、后送信息、作战背景信息等8个数据模块,建立了数据库系统管理系统,实现战伤数据采集、审核、浏览、查询与统计分析等功能。结论 战伤数据库结构合理,数据标准化程度高,战伤救治记录连续性强、时效性强,能够适应卫勤研究和战伤救治研究需要。
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    李悄
    2018, 42(2): 0-0.
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    [摘要] 目的 研究树突状细胞在重组蛋白TFPR1发挥佐剂功能中的作用。方法 在无菌条件下取4-5周龄雄性BALB/c小鼠的骨髓细胞,小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)与重组白介素4(rmIL-4)诱导分化六天后,加入重组蛋白TFPR1共孵育24 h,并以LPS处理为阳性对照、PBS为阴性对照,普通光学显微镜观察树突状细胞形态变化,罗丹明标记鬼笔环肽(TRITC Phalloidin)和DAPI共染色后,激光共聚焦显微镜观察细胞肌动蛋白和细胞核的分布情况,流式细胞术检测细胞表面CD40、CD80、CD86、MHCⅡ的表达水平,ELISA检测细胞培养上清中的细胞因子。结果 在普通光学显微镜和共聚焦显微镜下,加入TFPR1的树突状细胞与加入PBS的阴性对照树突状细胞相比具有显著的不同,而和加入LPS的阳性对照相似:光镜下发现大多数TFPR1处理的树突状细胞伪足变短直至消失,并变成圆形、悬浮于培养基中;激光共聚焦显微镜观察发现TFPR1处理的树突状细胞肌动蛋白由分布于细胞两极转至均匀分布于细胞膜上,从形态学上表明TFPR1可以促进DC成熟;流式细胞术检测到TFPR1处理的树突状细胞表面CD40、CD80、CD86、MHCⅡ的表达量上调,进一步证明TFPR1具有促进DC成熟的作用。ELISA检测发现TFPR1处理的树突状细胞可以产生高水平的IL-6、IL-8、TNF-α等细胞因子。结论 TFPR1不但能够促进树突状细胞成熟,且能激活树突状细胞产生细胞因子,说明树突状细胞在TFPR1的佐剂功能中发挥重要作用。 [关键词]:TFPR1;树突状细胞;佐剂;作用机制
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    HuHui
    2018, 42(2): 0-0.
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    目的 探究体内镉染毒对昆明小鼠骨髓造血干细胞线粒体功能的影响。 方法 选用20±2g雄性昆明小鼠,随机分为对照组、镉低剂量(7.5mg/kg)实验组和镉高剂量(15mg/kg)实验组,镉低剂量实验组和镉高剂量实验组小鼠分别于每周一、三、五灌胃给予氯化镉溶液,对照组小鼠灌胃同等体积的蒸馏水,连续6周,于第8周提取小鼠骨髓细胞,利用流式细胞仪测定骨髓造血干细胞线粒体膜电位和线粒体活性氧(ROS)水平。 结果 与对照组相比,实验组小鼠体重增长受到明显抑制(**P<0.01);实验组小鼠造血干细胞线粒体ROS水平显著升高(*P<0.05,**P<0.01),且高剂量实验组线粒体ROS升高显著高于低剂量实验组(#P<0.05);实验组小鼠造血干细胞线粒体膜电位显著降低(*P<0.05,**P<0.01),且高剂量实验组线粒体膜电位下降更显著(#P<0.05)。 结论 体内镉染毒引起昆明小鼠骨髓造血干细胞氧化损伤,导致线粒体功能异常,且与剂量相关。
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    朱业蕾,于学杰,郑学星
    2018, 42(2): 0-0.
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    目的 研究法匹拉韦(T-705)在细胞水平上对犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)增殖的抑制效果。方法 利用间接免疫荧光试验及50%终点法测定犬源CDV-11株与貂源CDV-3株在Vero细胞和DH82细胞中的生长曲线。采用CCK-8法测定T-705对Vero细胞及DH82细胞活力的影响;测定在不同时间加入不同浓度的T-705对CDV的抑制效率。结果 细胞毒性实验表明,T-705对Vero细胞的活性具有轻微抑制作用,对DH82细胞的活性基本不产生影响。在2.441μg/ml-1250μg/ml实验范围内,T-705可以有效的抑制CDV-3和CDV-11在Vero及DH82细胞中的增殖。在细胞感染病毒后的不同时间点(12h、24h、36h、48h)加入T-705,仍可以产生持久的抗病毒效果。结论 T-705可以在细胞水平高效抑制CDV的增殖,是治疗犬瘟热的候选药物。
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    WEIZHAO
    2018, 42(2): 0-0.
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    目的 比对分属于激活和抑制型中的不同核糖开关的调控功效,为实现基因电路的精准调控奠定基础。方法 构建不同核糖开关(addA与M6, TPP与btuB)调控的绿色荧光蛋白amcyan表达载体,通过荧光表达量、RT-qPCR分析在不同配体物浓度调控下的amcyan表达,与未含有核糖开关载体的表达量进行比较,进行动态调控效能分析。 结果 在addA与M6激活型核糖开关的调控下,随着配体物浓度的增加绿色荧光表达量增加,且addA核糖开关比M6核糖开关拥有更大的动态调控效能;相反,在TPP与btuB抑制型核糖开关的调控下,随着配体物浓度的增加绿色荧光表达量减少,且btuB核糖开关的动态调控效能略大于TPP核糖开关。 结论 相同作用机制的不同核糖开关调控功效是有差异的,拥有动态调控效能优势的激活型开关addA与抑制型开关btuB更适合在大肠杆菌中用于代谢精确调控与靶基因精准表达。
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    guhengming,huliangping
    2018, 42(2): 0-0.
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    目的 进行贝叶斯统计和经典统计在分位数回归分析中的比较,以便在不同场合下选择更加有效的方法。方法 选择大样本数据,基于经典统计的分位数回归分析用SAS中的QUANTREG过程实现;基于贝叶斯统计的分位数回归分析用SAS中的MCMC过程实现。分别采用十折交叉验证方法,通过训练集的拟合效果和预测集的预测效果两方面来评价模型拟合效果的优劣。结果 若采用全部样本建立模型时,基于经典统计的分位数回归分析评价指标略差于基于贝叶斯统计的分位数回归分析评价指标;基于部分样本作为训练集的十折交叉验证时,比较十次指标的均值,基于贝叶斯统计相对于基于经典统计而言,在具体的分位数回归方程中,其下四分位数(q1)和上四分位数(q3)的拟合效果为优,而中位数(q2)的拟合效果略差;对于预测效果而言,基于贝叶斯统计的分位数回归方程要优于经典统计的分位数回归方程。结论 在拟解决实际问题的场合下,如果要求准确度较高,主要考察各个分位数预测效果和拟合效果,可以选择贝叶斯分位数回归分析法;若主要考察中位数的拟合效果则需要谨慎选择。如果时间精力有限且样本量足够大,那么采用经典统计的分位数回归分析即可。
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    zhuyue
    2018, 42(2): 0-0.
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    摘要 目的 利用CRISPR/Cas9技术,构建靶向精氨酸甲基转移酶3(PRMT3)的基因编辑质粒,建立prmt3基因稳定敲除的非小细胞肺癌A549细胞株,检验prmt3基因敲除效率及其对非小细胞肺癌增殖的影响。方法 设计靶向prmt3基因的sgRNA序列,将合成的片段克隆到CRISPR/Cas9质粒载体LentiCRISPR中,挑取单克隆进行测序验证。将构建好的重组质粒和空载体分别进行慢病毒包装,并感染非小细胞肺癌A549细胞,利用嘌呤霉素进行筛选获得PRMT3稳定敲除细胞株,用Western blot方法检测细胞中PRMT3蛋白的敲除效率。然后将敲除PRMT3的A549混合细胞进行单克隆分选,分别利用平板克隆形成实验检测PRMT3敲除后细胞增殖能力,平板划痕实验检测其迁移能力,流式细胞技术检测细胞周期的变化,利用质谱进行蛋白质组学分析,初步筛查PRMT3可能的底物。 结果 经测序验证,我们成功构建了靶向prmt3基因的LentiCRISPR-PRMT3-sgRNA质粒。经Western blot方法检测,非小细胞肺癌A549 PRMT3敲除株中PRMT3的蛋白表达水平明显降低。经单克隆分选后,我们成功获得了PRMT3完全敲除的A549细胞株。 PRMT3敲除导致A549细胞的克隆形成能力明显增强,细胞迁移能力不变,细胞周期发生G2/M期阻滞。我们进一步用蛋白质组学的方法初步鉴定了PRMT3可能的底物。结论 我们利用CRISPR/Cas9技术成功的构建了PRMT3稳定敲除的非小细胞肺癌A549细胞株,我们发现PRMT3能调控细胞周期和增殖,也对其分子机制做了初步探索。
  • 实验研究
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    杨帅
    2018, 42(2): 0-0.
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    针对当前生物医学语料库涵盖实体种类少、实体关系相对简单,难以满足精准医学知识库发展需求的问题,本文以肝癌领域精准医学相关文献为标注文本,参照DDI、CRAFT等现有语料库构建过程,制定初期语料标注规范。在标注过程中通过质量监督、抽样检查等方式不断完善标注结果,修订标注规范,最终完成语料标注工作。该工作可对精准医学命名实体识别及关系抽取研究提供数据支撑。
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    LUQian
    2018, 42(2): 0-0.
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    [摘 要] 目的 制备BTN3A3单克隆抗体并进行鉴定。方法 用含小鼠IgG2a Fc标签的BTN3A3重组蛋白BTN3A3-mFc作为抗原免疫BALB /c小鼠,通过细胞融合获得杂交瘤细胞。用含人IgG1 Fc标签的BTN3A3重组蛋白BTN3A3-hFc作为检测原,筛选分泌BTN3A3单克隆抗体的杂交瘤细胞株。利用Western blot和间接免疫荧光对上述单克隆抗体进行鉴定。结果 共获得7株可稳定分泌BTN3A3单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Elisa、Western blot和间接免疫荧光结果显示,上述抗体可特异性识别BTN3A3。结论 获得能够应用于ELISA、Western blot及免疫荧光的BTN3A3单克隆抗体,为BTN3A3的功能性研究奠定了基础。
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    薛勇,付汉江,葛常辉,李清,郑晓飞
    2018, 42(2): 0-0.
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    目的生物体中存在大量具有重要生物学功能的RNA-DNA杂合链。本研究比较TRI试剂法、水饱和酚法和Tris饱和酚法提取小RNA-DNA杂合链片段的效果,为开展RNA-DNA杂合链的生物学功能研究提供方法。方法合成5’末端荧光分子修饰的短RNA和DNA片段,形成小RNA-DNA杂合链。分别采用TRI法、水饱和酚和Tris饱和酚法提取寡聚RNA-DNA杂合链,电泳分析提取结果。结果与结论水饱和酚和Tris饱和酚法均能提取到小RNA-DNA杂合链。本研究结果为小RNA-DNA杂合链功能研究和检测分析提供了基础。
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    LuNing,lizhihui,zhangchenggang
    2018, 42(2): 0-0.
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    目的 检测铵盐溶液对氢棒产氢的催化效果,并分析溶液中的含氢量与含氧量、氧化还原电位、pH等之间的相互关系。方法 将氢棒分别放置于不同浓度的氯化铵、硫酸铵、碳酸铵、碳酸氢铵、碳酸氢钠和亚硫酸钠等溶液的PET瓶中,置于40℃水浴锅分别反应0、2、4、6、8和10 h,反应结束后立即检测溶液中的含氢量、含氧量、氧化还原电位和pH值。结果 溶液中含氢量随反应时间和铵盐溶液浓度的增大呈递增趋势,而含氧量和氧化还原电位随着含氢量的增加呈递减趋势,且溶液中的含氢量与含氧量显著负相关(r=-0.984);溶液的pH随着含氢量的增加而增大。结论 铵盐对氢棒与水的反应具有良好的催化作用,氯化铵催化作用最强,硫酸铵次之,碳酸铵、碳酸氢铵较弱。本研究为氢棒在不同溶液中制氢能力提供了详实的补充数据;同时为深入研究不同浓度的富氢溶液的功能及作用奠定基础。
  • 实验研究
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    辛慧慧
    2018, 42(2): 0-0.
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    目的 通过体外研究验证金纳米星/胶原(AuNSs/Col)复合材料具有抗心肌细胞氧化应激损伤的作用,进而保护原有细胞和移植细胞免受损伤。方法 1)构建不同浓度的AuNSs/Col复合基质材料,利用live/dead、CCK-8法筛选材料的最佳浓度,作为实验组;2)待心肌细胞生长3天时(约覆盖盖玻片的70%~80%时),利用0和100umol/LH2O2诱导。6h后,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI/DAPI观察凋亡细胞的形态和早期细胞凋亡率,Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达情况。结果 1)Live/Dead和CCK-8实验均提示0.1mg/ml的AuNSs/Col复合材料对NRVM无毒性,且能进一步促其增殖;2)H2O2诱导的对照组和实验组都较未诱导组的细胞早期凋亡率明显增加,bcl-2/bax比值明显降低;H2O2诱导后,实验组较对照组的早期凋亡率明显降低,bcl-2/bax比值明显升高。结论 1)适宜浓度的AuNSs/Col复合材料对NRVM无毒性,与Col相比能进一步促进细胞的增殖。2)与Col材料相比AuNSs/Col复合材料能通过减轻凋亡以抵抗氧化应激损伤。
  • 实验研究
    SuXiaolei,Wangkun,WuZuze,ZhangQinglin,JinJide
    2018, 42(2): 0-0.
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    目的 观察牙髓干细胞来源的外泌体对脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞急性肺损伤模型的作用及机制。方法 牙髓干细胞培养至第6代后,换无血清培养基处理24小时后收集上清液,采用超速离心法分离外泌体。取对数生长期的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383接种于12孔板,分别用1μg/mL的LPS或联合外泌体处理细胞。在细胞处理前(0小时)和处理后6小时、12小时、24小时收集细胞上清液,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)。裂解提取细胞蛋白,采用Western Blot方法测定细胞外调节蛋白激酶(p44/42)、转录因子NF-κB(p65)、IκBα蛋白的表达量及其磷酸化水平。结果 与对照组比较,LPS处理组的肿瘤坏死因子-α,白细胞介素-1β和白细胞介素-6水平显著增高(P<0.05),提示LPS诱导急性肺损伤细胞模型成功。与LPS处理组相比,高剂量外泌体处理后,TNF-α和IL-1β表达量明显降低(P<0.05);IL-6在低剂量和高剂量的外泌体处理后均有明显降低(P<0.05)。牙髓干细胞来源的外泌体能降低转录因子NF-κB(p65),IκBα以及细胞外调节蛋白激酶(p44/42)的磷酸化水平。结论 牙髓干细胞来源的外泌体对脂多糖诱导的急性肺损伤有保护作用,机制可能通过抑制MAPK信号通路和NF-κB信号通路的激活有关。
  • 文献调研
  • 文献调研
    房彤宇
    2018, 42(2): 0-0.
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    加强国家生物防御科技支撑能力是保障生物安全的基础和关键,我军在维护国家主权领土完整、维护国家利益拓展和遂行非战争军事行动等方面需要进一步提升生物防御能力。当前,国际生物防御科技进展迅猛。在生物威胁检测诊断产品方面,主要包括生物威胁的新型、快速、便携、远程检测诊断技术。生防疫苗研发方面,新型病毒疫苗、细菌与毒素疫苗和疟疾疫苗取得积极进展。在生防药物研发方面,新型抗流感病毒药物、抗埃博拉病毒药物、抗马尔堡病毒药物以及治疗炭疽和鼠疫的新药不断涌现。未来,我国应继续围绕生物监测预警、生防产品转化和全谱性生防体系建设等方面展开科研部署。