军事医学

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我国携带KPC基因耐药菌流行现况分析

王盛书

2016, 40(6): 0-0.

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目的分析我国产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC）阳性菌的流行病学特征，探讨我国携带KPC阳性菌流行特征及耐药机制。方法收集2009～2015年报道我国blaKPC研究文献，对KPC阳性菌株种类与地区分布、感染来源、耐药谱和转移机制进行流行病学分析。结果我国共有21个省市报道blaKPC阳性菌株，其中浙江最多，占43.52%（P<0.01），阳性菌以肺炎克雷伯菌最多，占87.86（P<0.01）；感染阳性菌的患者男性居多（P<0.05），病人所在科室以ICU病区最多，占70.51%（P<0.01），痰液标本分离blaNDM-1阳性菌最多，占45.62%（P<0.01）；blaKPC阳性菌对头孢菌素类、碳青霉烯类抗生素、氨基糖苷类抗生素耐药率普遍较高，对多粘菌素、替加环素的耐药率较低；产KPC-2酶或合并多种β-内酰胺酶和外膜蛋白缺失是导致碳青霉烯类抗生素耐药的重要原因。结论携带KPC基因的耐药菌感染已经成为一个全球性的公共卫生问题，需要深入研究其发生发展规律。

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蛋白酶抑制剂茚地那韦的知识产权保护状况和风险分析

盛立

2016, 40(6): 0-0.

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本文对蛋白酶抑制剂茚地那韦进行了国内外知识产权保护状况的初步分析，对于茚地那韦国际和国内的申请量、申请地区、申请人、保护状况和期限等方面进行了多方面统计，可以看出国外原研企业对于茚地那韦专利申请已经逐年下降，但目前专利仍然对该药物有一定的保护力度，但该药物在合成方法、衍生物、新剂型、新用途等方面仍有较大的研发和保护空间，相关医药企业仍然可以从这些方面对该药物进行研究改进或创新。

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论著

宫颈癌中MTSS1基因与Shh信号通路的关系研究

张思

2016, 40(6): 0-0.

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[摘要] 目的初步探讨宫颈癌中MTSS1基因与Shh信号通路间的关系。方法取2011年12月至2015年10月期间90例宫颈组织，应用实时荧光定量PCR（q-PCR）检测正常宫颈组、早期宫颈癌组及中晚期宫颈癌组中MTSS1基因及Shh信号通路相关基因的表达水平；Western印迹法及免疫组化检测MTSS1及Gli1蛋白表达情况。结果 q-PCR结果显示，随着临床分期的升高，MTSS1、Ptch、Smo及Gli1基因表达水平逐渐升高，其中中晚期宫颈癌组中四个基因mRNA表达量均最高（P＜0.01）；Western印迹结果显示，中晚期宫颈癌组MTSS1蛋白表达率明显高于早期宫颈癌组及正常宫颈组（P＜0.05）；免疫组化检测MTSS1及Gli1蛋白在宫颈癌组较正常组中的表达增强，其中中晚期宫颈癌组中两者多为强阳性表达。结论宫颈癌发生发展中MTSS1的表达与Shh信号调控相一致，均随癌症发展表达增强，可能同为预测宫颈癌发生发展的指标与潜在的治疗靶点。

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实验研究

大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮质神经元自噬的研究

赵亚倩,黄国伟,陈爽,苟芸,张绪梅

2016, 40(6): 0-0.

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目的检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后皮质神经元的损伤及自噬情况，并初步探讨自噬在脑缺血损伤过程中的作用。方法用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，实验动物随机分为：假手术组（Sham组）和大脑中动脉栓塞再灌注组（MCAO组）。HE染色检测大鼠皮质神经元损伤。免疫荧光双标记法检测皮质神经元自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的表达水平。结果与Sham组比较，大鼠脑缺血再灌注后，皮质神经元损伤严重；LC3/NeuN，Beclin-1/NeuN双标阳性细胞数显著增加(P<0.05)，且LC3/NeuN，Beclin-1/NeuN双标阳性细胞数分别占LC3，Beclin-1单标阳性细胞数的比例均接近100%，说明LC3、Beclin-1主要表达于神经元。结论脑缺血再灌注可能主要通过增加LC3、Beclin-1蛋白表达水平激活皮质神经元内的自噬，并进一步引起细胞损伤。

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实验研究

双抗体夹心ELISA定量测定人血浆肌钙蛋白I方法的建立

孙崇云

2016, 40(6): 0-0.

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[摘要] 目的基于双抗体夹心ELISA，建立一种适用于基层医疗机构、简便低廉的人血浆肌钙蛋白I（cTnI）定量检测方法。方法基于抗原、抗体筛选，包被抗体、酶标抗体用量优化，建立双抗体夹心ELISA检测cTnI的方法。测定cTnI标准抗原，利用Curve Expert软件建立定量公式，进而根据临床大型自动化仪器的血浆样本实测结果对检测浓度进行校准，从而获得完整定量计算公式，实现ELISA测定OD值到血浆中cTnI浓度的直接定量。结果双抗体夹心ELISA测量cTnI的敏感性可达0.1ng/mL，敏感性满足临床要求。少量临床样本的评价实验显示，双抗体夹心ELISA定量结果与临床大型自动化仪器测得的浓度无统计学差异（p＞0.05）。结论本研究所建立的双抗体夹心ELISA法可定量检测人血浆cTnI。

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一种高性能磁性复合微球的制备及其在DNA提取中的应用

蒋娜

2016, 40(6): 0-0.

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目的研制一种分散性好、磁响应能力强的高性能Fe3O4@SiO2磁性复合微球，以配合核酸提取仪快速、自动分离纯化DNA。方法采用超声辅助的Stöber合成法在400~500 nm Fe3O4磁性微球表面快速包覆一层二氧化硅，通过调节投入正硅酸乙酯（TEOS）的量，制备壳层厚度为10~70 nm的Fe3O4@SiO2磁性复合微球。通过透射电镜(TEM )、超导量子干涉磁强计(SQUID)对磁性复合微球进行表征。通过提取鲑鱼精DNA、乙肝病毒及质粒菌DNA验证其DNA提取效率。结果 Fe3O4@SiO2磁性复合微球(T100)提取DNA效果最好，效率可达85%以上，饱和磁化强度为65 emu/g。与商业化磁珠试剂盒相比，T100具有更好的提取效率。结论制备出一种高性能Fe3O4@SiO2磁性复合微球，可应用于核酸提取仪。

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重组人肝活素（HPS）对四氯化碳诱导肝细胞损伤的保护作用研究

吴帆

2016, 40(6): 0-0.

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[摘要] 目的肝脏疾病一直是我国面临的严重公共卫生问题，研究具有肝特异性的保肝药物，对肝病的防治具有十分重要的意义。肝活素（hepassocin，HPS）是一种具有促肝细胞生长，保护肝细胞免于损伤的一种肝特异性生长因子，对其保护机制进行研究将为其在肝病的防治中提供重要的实验依据。方法通过真核表达系统获得重组人肝活素，通过EdU掺入实验检测其活性。用CCl4建立肝细胞损伤模型，在此基础上用不同浓度肝活素进行处理或干涉内源HPS，检测细胞上清中转氨酶、乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽转移酶的变化。结果我们所制备的肝活素纯度达到95%以上，具有良好的促细胞增殖活性。10%CCl4处理可造成肝细胞损伤，肝活素处理可显著降低转氨酶及乳酸脱氢酶水平，增加超氧化物歧化酶及谷胱甘肽转移酶的水平；干涉HPS则显著增加转氨酶及乳酸脱氢酶水平，降低超氧化物歧化酶及谷胱甘肽转移酶的水平。结论肝活素能够通过增强肝细胞的抗氧化能力减轻肝细胞的损伤。

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肝癌细胞上皮-间质转换模型的建立与差异性表达微小RNA分子的高通量筛选

王海洋

2016, 40(6): 0-0.

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目的：拟利用转化生长因子TGF-β1诱导人肝癌细胞发生上皮-间质转换（epithelial mesenchymal transition, EMT），建立EMT模型。方法：在低血清培养条件下，用TGF-β1处理肝癌细胞2-6天，观察细胞形态变化，采用western blot检测EMT典型标志物的表达变化，流式细胞术检测肝癌肿瘤干细胞标志物CD13和EpCAM的表达变化，并利用微小RNA芯片技术 (miRNAs chip) 筛选和分析TGF-β1处理前后差异表达的miRNAs。结果：经10 ng/ml TGF-β1诱导2-6天后，多数细胞形态由上皮样转变为成纤维样，细胞间间隙明显增大；Western blot定量分析结果显示，10 ng/ml TGF-β1处理后，肝癌细胞E-CADHERIN 表达水平显著性下调；流式细胞术结果显示，CD13和EpCAM显著性上调；对微小RNA芯片结果分析得到35种差异表达比较显著的miRNAs，经过生物信息学分析，这些差异表达的miRNA在转录调控中发挥了重要作用。结论：在低血清培养条件下，用10 ng/ml TGF-β1处理肝癌细胞2-6天，细胞发生明显的EMT过程，利用该方法可成功建立肝细胞癌的体外EMT细胞模型，在此模型中，可以对差异表达的miRNAs进行筛选分析和进一步的功能研究。

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实验研究

IL-1RA-PEP融合蛋白的构建及其对脑缺血再灌注继发性细胞凋亡的抑制作用研究

张冬冬

2016, 40(6): 0-0.

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[摘要] 目的构建白介素-1受体拮抗剂（IL-1RA）与细胞渗透肽（PEP-1）融合蛋白，探讨其对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的抑制作用。方法构建IL-1RA与PEP-1融合基因，通过诱导表达和纯化制备IL-1RA-PEP融合蛋白。建立大鼠大脑中动脉阻断模型（MCAo），形成缺血再灌注，静脉注射IL-1RA-PEP，24h后检测其对大鼠脑组织的渗透能力，以及脑组织梗死体积，炎性细胞浸润和神经细胞凋亡情况，分析相关凋亡蛋白变化情况。结果 IL-1RA-PEP融合蛋白具有拮抗IL-1的生物学活性，其能有效的渗透进入缺血再灌注大鼠脑组织。给药24h后，缺血半球脑梗死体积减少，神经细胞凋亡数量减少，caspase3和caspase9等凋亡蛋白表达水平下降，同时BCL-2和BCL-XL抗凋亡蛋白表达水平升高。结论 IL-1RA-PEP融合蛋白能有效渗透缺血再灌注大鼠脑组织，通过调控相关凋亡蛋白，抑制了缺血再灌注后脑组织继发性神经细胞凋亡，对缺血再灌注损伤起到了保护效应。

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实验研究

不同运动强度下运动心率达到稳定的时间特征

申慧祥,陈学伟,王静,安改红,李超,张建霞,马强

2016, 40(6): 0-0.

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[摘要] 目的观察不同运动强度下运动心率达到稳定的时间变化特征,探讨不同运动强度下运动心率的最佳测量时间。方法以70名青年男性战士为对象，在功率自行车上进行不同强度(20w、40w、60w、80w、100w、120w、140w、160w、180w)的运动，每一运动强度持续6min；采用功率自行车自带的心率带，实时监测被试者运动中的心率，每间隔1min记录一次心率值。结果对于20w、40w和60w强度的运动，初始时运动心率随时间呈上升趋势，运动1min之后运动心率不再持续上升，进入稳定期；1min后（包括1min）的运动心率相互间比较均无显著性差异（P＞0.05）。对于80w、100w强度的运动，运动心率在2min时进入稳定期；对于120w、140w强度的运动，运动心率在3min时进入稳定期；对于160w、180w强度的运动，运动心率在4min时进入稳定期。结论在不同运动强度下运动心率达到稳定所需要的时间不同，运动心率达到稳定的时间与运动强度呈正相关，运动强度越大运动心率达到稳定的时间越长。

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血锌水平与2型糖尿病伴微量白蛋白尿的相关性研究

焦晓静,朱晗玉,宁小元,阎磊,高素华,邵凤民

2016, 40(6): 0-0.

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目的探讨血锌水平与2型糖尿病伴微量白蛋白尿的相关性分析。方法选择2014年8至 2015年5月在我院就诊的188例2型糖尿病患者（包括112例正常白蛋白尿患者和76例微量白蛋白尿患者）和95例健康志愿者，对其性别、年龄、收缩压、舒张压、BMI指数、糖化血红蛋白、血锌水平、血肌酐、肾小球滤过滤（eGFR）和尿白蛋白等临床数据进行回顾性分析。结果与健康对照组相比，2型糖尿病组的血锌浓度较低(P <0.01)。2型糖尿病患者中，微量白蛋白尿组较正常白蛋白尿组的血锌浓度低(P <0.05)。较低血锌水平的2型糖尿病患者较正常血锌水平者的eGFR低(P <0.01)。经相关性分析，血锌水平与2型糖尿病患者的血肌酐水平负相关(r=-0.289, P <0.001) 、糖化血红蛋白负相关(r=-0.177, P <0.05) 、尿白蛋白负相关(r=-0.478, P <0.001)，而与eGFR正相关（r=0.183, P <0.05）。结论 2型糖尿病患者血锌水平较低，微量白蛋白尿加重其低血锌水平，血锌水平可以预测2型糖尿病的肾脏损害。因此，应监测2型糖尿病患者的血锌水平变化。

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DARPA生物技术研究升级转型的启示与借鉴

吴曙霞

2016, 40(6): 0-0.

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随着生物技术的快速发展，颠覆性技术频繁取得突破，生物技术成为引领未来科技革命的关键技术。因此美国国防部高级研究计划局新近成立了生物技术办公室，加强对生物技术的部署与管理，这标志着美国已将生物技术的国防应用提升到新的战略高度。为把握生物技术发展与国防领域应用趋势，本文对DARPA生物技术领域的管理举措与项目布局进行了系统分析梳理，结合DARPA基金资助项目发表论文进行聚类分析，发现脑机接口、合成生物学、计算生物学等技术为其重点领域，并根据DARPA在生物及相关技术领域的整体布局与管理组织经验提出启示借鉴，为我国国防生物技术发展与管理提供决策参考。

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实验研究

双抗体夹心ELISA法检测石头鱼毒素

戴秋云,周志杰,周志杰,刘株果,刘株果,周志杰,刘株果

2016, 40(6): 0-0.

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目的建立石头鱼毒素（neoVTX）的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法，为石头鱼毒素的检测、中毒诊断及治疗提供依据。方法以过碘酸钠法偶联马抗-HRP，利用双抗体夹心ELISA方法检测neoVTX。结果该检测方法的线性范围在磷酸盐缓冲液（PBS）中为4-512 ng/ml，线性回归方程为Y=1.676X-1.140 (r2=0.9728, n=8, P<0.0001)，在血清中检测线性范围为4-2048 ng/ml，线性回归方程为Y=0.3094X-0.1208 (r2=0.9907, n=10, P<0.0001)。牛血清白蛋白、卵清蛋白及人血清对检测结果无干扰。结论成功建立了石头鱼毒素的双抗体夹心ELISA检测方法，该方法有较高的灵敏度和特异性，适用于溶液中及血清中微量neoVTX的样品分析。

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论著

正加速度(+Gz)暴露对冠脉不同程度狭窄模型猪MIF表达的影响

代传芬代传芬

2016, 40(6): 0-0.

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目的研究+Gz暴露对冠脉不同程度狭窄模型猪血浆及血管巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的影响。方法 25头巴马小型猪，在胸腔镜直视下手术丝线永久性结扎左前降支近端建立不同冠脉狭窄模型。各组模型猪进行+Gz暴露，并观察其最大+Gz耐受值。在最大+Gz暴露处理前后1 min 留取静脉血并分离血浆，应用ELISA法检测MIF的含量。采用RT-PCR和免疫组化检测+Gz暴露后各组小型猪升主动脉MIF的表达情况。结果最大可耐受+Gz暴露后，各组模型猪MIF表达水平均较暴露前明显升高(P<0.05)，且中、重度狭窄组模型猪血浆MIF浓度及升主动脉MIF表达水平均较假手术组明显升高(P<0.05)，而轻度狭窄组则升高不明显(P>0.05)。结论 +Gz暴露对冠脉不同程度狭窄模型猪MIF的表达存在影响，且随狭窄程度加重，MIF表达增多。

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p53在细胞自噬发生中的调节作用

邹书仙

2016, 40(6): 0-0.

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细胞自噬是一种进化上比较保守的分解代谢过程，不仅参与细胞的许多生理过程，而且与多种病理状态包括癌症相关，因此其调控机制也相当精确且复杂。越来越多的研究表明：抑癌基因p53在细胞自噬反应发生中具有双重调节作用，这主要决定于其亚细胞定位。本文就p53对自噬反应的正、负调控作用及机制做一综述。

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Mxi1基因敲除小鼠遗传背景的转换研究

吴玲玲

2016, 40(6): 0-0.

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目的对FVB/N品系Mxi1基因敲除（Mxi1-/-）小鼠进行遗传背景转换，为研究疾病发病机制提供更多种类的基因修饰小鼠。方法将FVB/N品系杂合子小鼠（Mxi1+/-）与异性C57BL/6品系野生型小鼠（Mxi1+/+）杂交，获得杂合子F1代后将其与异性C57BL/6品系Mxi1+/+小鼠回交，再选择F2杂合子与C57BL/6品系Mxi1+/+小鼠回交，依此再回交8次后，子代互交。利用鼠尾DNA和组织mRNA进行PCR、组织蛋白进行Western blot检测鉴定。结果 PCR和Western blot结果显示，随机选取的任意自交子代纯合子小鼠体内不表达Mxi1的mRNA和蛋白质，成功获得C57BL/6品系Mxi1-/-小鼠。结论通过杂交-回交的方式成功获得的新品系Mxi1-/-小鼠能够稳定的将突变的基因传递给子代，这一成果为疾病动物模型的建立提供了更多的选择。

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论著

高营养状态对肿瘤细胞形态和成瘤性的影响

陈思宇,刘金,秦亚茹,段海峰,刘金,葛志强

2016, 40(6): 0-0.

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目的营养状态在癌症治疗中的作用一直受到广泛关注。本课题旨在研究高营养状态对肿瘤细胞的影响。方法在肿瘤细胞的培养体系中添加不同浓度的FBS（5%、10%、 25%、50%），以模拟不同的营养状态。培养3周后，CCK-8法测定细胞增殖；克隆形成和体内成瘤实验评价肿瘤细胞成瘤性；最后通过油红染色、流式细胞术、电镜和蛋白质印迹检测来探讨可能的机理。结果高血清浓度能促进人乳腺癌细胞系SKBR3细胞和人前列腺癌细胞系PC3M细胞的增殖，但会引起细胞空泡化，并抑制其克隆形成和成瘤能力。诱导后的PC3M细胞，特异标志分子LC3 Ⅱ/Ⅰ比例上调，电镜中观察到自噬小体增多，表明高浓度的血清可能通过激活自噬来抑制肿瘤细胞的成瘤性。结论高营养状态对肿瘤细胞成瘤性有明显抑制作用，有希望成为新的癌症治疗策略。

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医用诊断X射线的特性与防护研究

杜继星

2016, 40(6): 0-0.

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根据X射线的能量分布特点，结合X射线与物质相互作用的过程，本文针对医用诊断X射线的特性与防护进行了研究。理论分析直射、散射与透射X射线能量分布，计算不同物质对X射线的屏蔽效果并进行测量。结果显示X射线透过物体时，强度变低，平均能量提高，能谱变窄；散射线能量和强度都小于原发X射线。不同物质对X射线屏蔽效果不同。综合利用多种防护措施可以很好的防护诊断X射线的辐射。

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山西省215例自然流产抗心磷脂抗体及抗β2糖蛋白抗体分析

贺美荣

2016, 40(6): 0-0.

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摘要目的：对山西省215例自然流产进行抗心磷脂抗体（anticardolipin antibody，ACA）及抗β2糖蛋白抗体（Anti-beta 2-glycoprotein antibody， aβ2-GPI）分析，探讨这两种抗体与自然流产的相关性。方法：215例自然流产患者与100例健康对照者分为两组，采用间接酶联免疫法分别检测IgG型和IgM型ACA以及aβ2-GPI并用多元logistic回归分析其相关性。结果：自然流产患者IgG型和IgM型ACA及aβ2-GPI阳性率分别为21.3%、13.0%和18.1%，高于正常对照组，差异有显著性（P<0.05）；多元logistic回归分析显示IgG型ACA及aβ2-GPI与自然流产独立相关。结论：ACA和aβ2-GPI与自然流产关系密切，两类抗体检测有助于该疾病诊断。

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