实验研究
ZhangPingping
2016, 40(5): 0-0.
[摘要] 目的:研究单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)对蛋白酶体α7亚基(PSMA7)蛋白稳定性的影响。方法:通过免疫印迹的方法检测Mps1对PSMA7稳定性的影响。通过重组PCR的方法将663位的天冬氨酸突变为丙氨酸,构建Mps1激酶活性缺失的突变体(pcDNA3-Flag-Mps1 KD),并通过免疫印迹检测其对PSMA7稳定性的影响。结果:免疫印迹结果证实构建的突变质粒pcDNA3-Flag-Mps1 KD能够正确表达;免疫印迹实验表明野生型Mps1可以明显增加PSMA7的稳定性,而Mps1激酶活性缺失的突变体则不能够增强PSMA7的稳定性;加入Mps1激酶活性抑制剂后,降低PSMA7稳定性。结论:成功构建了Mps1激酶活性缺失突变体真核表达质粒pcDNA3-Flag-Mps1 KD,并在293T细胞中得到了表达;研究还发现Mps1通过其激酶活性增强PSMA7稳定性,为我们进一步研究Mps1对蛋白酶体功能影响及对肿瘤发生发展打下基础。