军事医学

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实验研究

生物气溶胶激光遥测系统光源关键参数优化

YangZijian

2015, 39(8): 0-0.

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利用激光雷达技术可以提高对于生物气溶胶的监测效率，激光雷达光源参数对于系统的危险性和探测灵敏度有重要影响。目前对于生物气溶胶的激光遥测系统按光源配置参数主要分为3类，即传统激光雷达、微脉冲激光雷达，伪随机调制激光雷达。本文参考美国关于激光产品使用的安全标准，并建立对应的激光雷达的数学模型，通过计算不同重复频率、脉冲能量、发散角、危险距离等影响因素，以及对比三种激光雷达光源配置方式的信噪比和安全性，计算出最优的光源配置方法，阐明了较为安全的应用方式。计算结果表明，在保证人眼安全的前提下，使用微脉冲雷达的光源激发方式，脉冲频率设置约为55KHz时系统探测的信噪比最高。

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综述

IL-12家族在自身免疫性疾病中的免疫调节作用

Wangxiaoqian

2015, 39(8): 0-0.

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白细胞介素-12 ( Interleukin-12, IL-12) 家族IL-12、IL-23、IL-27及其新成员IL-35是具有异源二聚体结构的家族，并且结构之间相互交叉重叠，IL-12家族各成员之间存在着相互协同、相互拮抗的网络。这就赋予了它们独特的功能特点，不仅在感染及炎症过程中起着重要的调节作用，而且与脑脊髓炎、多发性硬化症、克罗恩病、类风湿性关节炎等多种自身免疫性疾病的发病和治疗密切相关。本文主要概括了IL-12家族的结构特点，并探讨了IL-12家族在部分自身免疫性疾病中的免疫调节作用。

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抵抗素通过内质网应激致血管内皮细胞产生胰岛素抵抗

zhangna

2015, 39(8): 0-0.

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目的: 本研究在人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）水平以及大鼠体内实验中，探讨抵抗素（resistin）是否能够通过内质网应激导致血管内皮细胞产生胰岛素抵抗。方法: 培养HUVECs并应用抵抗素（R组）或内质网应激缓解剂牛磺熊去氧胆酸（tudca组）处理细胞，以胰岛素处理（I组）为阳性对照组，Western blotting检测内质网应激标记蛋白GRP78、P-akt和P-eNOS蛋白的相对表达量；体内实验制备各组大鼠胸主动脉血管环，检测胰岛素诱导的血管舒张能力，并行HE染色观察血管的形态学改变。结果： Western blotting检测结果显示R组GRP78蛋白表达量显著增高，P-akt和P-eNOS蛋白表达量明显降低，与对照组比较差异有统计学意义，而tudca组GRP78、P-akt和P-eNOS蛋白表达量与对照组比较，差异均没有统计学意义。R组血管对胰岛素诱导的舒张作用明显减弱，而tudca组血管舒张能力与对照组相比，差异没有统计学意义。HE 染色显示R组大鼠血管壁明显增厚，平滑肌及弹力纤维有显著增生。结论：抵抗素能够通过内质网应激途径致血管内皮细胞产生胰岛素抵抗，检测血清中抵抗素的水平对临床糖尿病的预防与诊治有重要意义。

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综述

补体C5a与急性肺损伤关系研究进展

杨丽梅

2015, 39(8): 0-0.

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急性肺损伤是多种原因诱发的肺部过度炎症反应，其发病率和死亡率均较高。由于其发病机制复杂且并未完全阐明，至今仍无特效救治药物。许多研究表明补体活性成分C5a及其受体的激活在急性肺损伤的发生过程中是必须的，以C5a及其受体作为靶点的药物研发有望为急性肺损伤的治疗带来新的希望。

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miR-873靶向 Survivin基因对人前列腺癌PC3细胞侵袭性的影响

litan

2015, 39(8): 0-0.

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目的: 探讨人前列腺癌PC3细胞中miR-873和Survivin基因的表达，阐明miR-873对Survivin基因的靶向调控作用以及对PC3细胞侵袭性的影响。方法: 培养PC3细胞并应用免疫荧光化学技术检测Survivin基因的表达；采用生物信息学方法对miR-873和Survivin基因的匹配关系进行预测并应用双荧光素酶报告基因系统鉴定；转染miR-873模拟物后，行qRT-PCR检测miR-873和Survivin基因的表达，Western blotting检测Survivin蛋白的表达，Transwell小室检测癌细胞体外的侵袭性。结果：倒置相差显微镜下可见细胞均匀分布，形态规则均一；免疫荧光化学显示胞质内有Survivin蛋白的表达；靶基因预测软件miRanda和TargetScan显示miR-873和Survivin基因匹配良好，双荧光素酶报告基因系统鉴定发现miR-873能够结合Survivin mRNA 3'UTR并有效抑制其表达。qRT-PCR和Western blotting检测结果均表明miR-873的过表达能够下调Survivin基因表达。Transwell实验表明miR-873的过表达能够抑制PC3细胞的侵袭。结论：miR-873通过靶向作用于Survivin mRNA 3’UTR负性调控人前列腺癌PC3细胞中Survivin的表达，并能够抑制其侵袭。

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一种新型非融合可溶原核表达载体的构建及应用

邢伶越

2015, 39(8): 0-0.

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[摘要] 目的：以具有广泛助溶活性的SUMO蛋白为辅助蛋白，利用翻译藕联，构建一种新型非融合可溶原核表达载体，实现广谱抗病毒蛋白RA在大肠杆菌中的非融合可溶表达。方法：以PCR方法从酵母基因组中克隆SUMO蛋白基因smt3并进行定点突变，去除其中的EcoR I酶切位点，获得同义突变体 mSUMO。通过翻译藕联Linker序列的设计、合成，构建以mSUMO蛋白为辅助蛋白的翻译藕联表达载体pTIG-mSUMO。PCR扩增获得带有相应酶切位点的广谱抗病毒蛋白RA的基因，将其克隆至pTIG-mSUMO中，获得表达载体pTIG-mSUMO/RA，实现RA在大肠杆菌中的非融合可溶性表达。结果：IPTG诱导蛋白表达以后，SDS-PAGE和Western blot检测证实：目的蛋白RA的表达量明显增加，且可溶比例约占50%。结论：以优化后的SUMO为辅助蛋白，成功构建了一种非融合的可溶原核表达载体pTIG-mSUMO，实现了RA蛋白在大肠杆菌中的高效非融合可溶表达，既提高了表达水平，也提高了可溶性。pTIG-mSUMO作为一种可溶的非融合表达载体，在实现外源蛋白的高效可溶表达方面，很可能具有一定的普遍性。

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可解离的人胰高血糖素样肽1与人血清白蛋白融合蛋白的构建表达及其初步药代动力学和药效动力学评价

夏姗,赵洪亮,薛冲,吴晓杰,李月,杜莹莹,武福军,张娜,刘志敏

2015, 39(8): 0-0.

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目的构建四种在体内以不同速率解离的人胰高血糖素样肽1（GLP-1）与人血清白蛋白融合蛋白，探索各种融合蛋白的疗效与其解离速率之间的关系，获得在药代动力学和药效动力学之间保持平衡的最佳的融合蛋白。方法通过重叠延伸PCR扩增出具有不同多肽接头的融合蛋白基因，将其克隆到pPIC9载体，电击转化毕赤酵母GS115，经甲醇诱导，分泌表达各种融合蛋白，将各种融合蛋白分离纯化后进行初步药代学和药效学研究。结果融合蛋白与弗林蛋白酶作用后，不可解离的Gly2-GLP-1-GGGGG-HSA融合蛋白未发生解离，而可解离的融合蛋白Gly2-GLP-1-VTR-HSA为慢解离，Gly2-GLP-1-SARSVRA-HSA为中等解离，Gly2-GLP-1-GRSRVTRSV-HSA 为快解离。体外生物学活性表明各种融合蛋白均具有促进MIN6细胞胰岛素分泌的功能。体内药代学检测结果表明各种融合蛋白在体内的半衰期大小依次为 Gly2-GLP-1-GGGGG-HSA、Gly2-GLP-1-VTR-HSA、Gly2-GLP-1-SARSVRA-HSA、Gly2-GLP-1-GRSRVTRSV-HSA。体内药效学检测结果表明各种融合蛋白均表现出降糖活性，且其活性高低依次为Gly2-GLP-1-VTR-HSA、Gly2-GLP-1-SARSVRA-HSA、Gly2-GLP-1-GRSRVTRSV-HSA、 Gly2-GLP-1-GGGGG-HSA。结论引入蛋白酶切割位点后，GLP-1可以在体内从融合蛋白中解离出来，使其恢复生物学活性。只有控制融合蛋白在体内适当的解离速率才能达到最佳的疗效，从而在药代动力学和药效动力学性质之间达到平衡。

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实验研究

动作灵活性纸笔测验的设计与信效度研究

王笑微

2015, 39(8): 0-0.

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目的设计手部动作灵活性的纸笔测验并对其进行信、效度检验。方法以测量手部动作灵活性为目的设计纸笔测验，该测验包括测验专用纸和固定好的2支圆规组成，要求被试用一只手依次轮换圆规在测验纸规定的线框内画圆。共对712名被试施测动作灵活性纸笔测验，同时施测武警多项能力倾向测验，其中46名被试还用手指灵活性测验仪测验；重测是取45名被试隔23天进行。另外收集37名被试的训练成绩。结果被试在动作灵活性纸笔测验的得分与武警多项能力倾向测验其它分测验得分的相关在0.04－0.35，与训练成绩的相关0.40，与拧螺丝板测验得分的相关0.48；重测信度为0.57。结论：动作灵活性纸笔测验效度达到同类测验的水平，且简单易行，可作为动作灵活性的团体测量工具。

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基于光纤束的多通道干式生化传感器设计

余明

2015, 39(8): 0-0.

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相对于传统的湿化学分析，干式生化分析具有简便、快捷、维护简单等优点，得到了越来越广泛的推广。本文介绍了一种基于MXN光纤束的多通道干式生化传感器，光路上采用多模光纤构造的MXN光纤束和单一非球面耦合镜片设计，代替冗杂的分光系统，便于仪器小型化、轻量化；采用参比LED实现双光束补偿，提高测量精度；电路上采用放大倍率自适应的光电转换电路，在提高了测量精度的同时，进一步简化了操作过程。经实验证明，使用该传感器测量得到的信号干扰小，各通道一致性好，测量准确可靠，且整体结构紧凑便携，可很好满足干式生化分析的要求。

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多通道高通量DNA合成仪控制系统设计与实现

梁晓会,黄传伟,范晓逶

2015, 39(8): 0-0.

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研究了一种多通道、高通量DNA合成控制系统，可实现单次96通道寡核苷酸长链的全自动合成。该控制系统以松下FP2系列PLC及其外围功能模块为核心，完成合成文件和序列文件的解析执行，以及自动和手动合成操作的过程控制；基于YHEditor组态软件和VC6.0开发上位机人机交互界面，完成合成过程配置，以及流量校准、位置校准等参数设置，并与主控系统完成数据交互。经15万条DNA应用合成及测序，结果表明合成时间达到4min/cycle，耦合效率为99%，且试剂消耗量少，合成过程配置灵活，运行稳定可靠，满足高通量、低成本、高效率合成需要。

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环孢霉素A对雄性生殖毒性的研究进展

潘晓燕

2015, 39(8): 0-0.

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环孢霉素A （Cyclosporine A，CsA）是器官移植手术后常用的一种免疫抑制剂，但其长期使用后产生的睾丸毒性不容忽视，严重影响了器官移植患者正常的生育能力。为探讨CsA对雄性生殖系统的损伤，本文从其对生殖器官发育的影响、对生殖系统损伤的作用机制以及目前缓解CsA生殖毒性的药物研究三个方面进行阐述，旨在引起广大医学工作者对CsA生殖毒性的关注和重视，同时为研制开发缓解CsA生殖毒性的药物提供借鉴。

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过表达N-糖基转移酶的糖基工程酵母菌构建

毛银平

2015, 39(8): 0-0.

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[摘要]目的通过过表达N-糖基转移酶，构建一株糖基化修饰效率更高的糖基工程酵母。方法利用尿嘧啶（URA3）营养缺陷型筛选标记，在前期构建的糖基工程酵母菌株4-32中转入醇氧化酶启动子(alcohol oxidase promoter，AOX1)控制的利士曼原虫N-糖基转移酶(stauroporine and temperature sensitivity3，STT3)D亚基，构建一株过表达N-糖基转移酶的糖基工程酵母菌株4-32-STT3D。通过SDS-PAGE，Western Blot和N-糖肽酶(peptide-N-asparigine amidase F，PNGase F)酶切等方法，分析其表达的抗HER2抗体(anti-human epidermal growth factor receptor 2)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF)的N-糖基化程度，并测定STT3D转入和表达对糖基工程酵母生长情况的影响。结果 SDS-PAGE结果显示，4-32-HL酵母菌表达的抗HER2抗体除与哺乳动物细胞表达的商业化的抗体有相同的55×103左右的重链主带外，还有一条分子量约为50×103的条带，该条带即为未糖基化的抗体重链。PNGase F酶切后，上述重链均呈50×103的均一条带，Western Blot分析证明这些条带均为抗体成分。分析发现转入STT3D的工程菌4-32-HL-STT3D菌表达的抗HER2抗体则为均一的55×103条带，无未糖基化的50×103条带。同样分析发现，普通糖基工程酵母菌表达的报告蛋白GM-CSF呈现为22×103和20×103的两条带，而转入STT3D后的4-32-GM-CSF-STT3D工程菌表达的则为均一的22×103条带。PNGase F酶切后，这些条带均为分子量约18×103的均一条带。统计学分析显示STT3D转入和表达对糖基工程酵母生长的影响较明显。结论过表达N-糖基转移酶的糖基工程酵母对靶标蛋白具有更高的N-糖基化修饰效率。 [关键词]糖基工程酵母；STT3D；抗体；N-糖基化

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临床观察

低分子肝素对慢性阻塞性肺疾病急性加重治疗效果的Meta分析

周凌

2015, 39(8): 0-0.

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摘要目的系统评价低分子肝素（LMWH）治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）的疗效。方法计算机检索文献，查找LMWH＋常规治疗与常规治疗比较治疗AECOPD疗效的随机对照试验。按照纳入排除标准筛查文献，提取资料，进行质量评价，采用RevMan 5.5软件进行Meta分析。结果共纳入12个RCT，共计879例患者。Meta分析结果显示1.与对照组相比LMWH可改善AECOPD患者的氧分压、二氧化碳分压。2. LMWH治疗组对于患者肺功能FEV1和红细胞压积的改善，与对照组无统计学差异。结论 LMWH治疗组不能较对照组改善AECOPD患者患者FEV1和红细胞压积指标，但能有效改善患者动脉血气指标。但本文纳入的研究质量较低，随即对照的过程未清除报告，存在偏倚的中度可能性，期待更多大规模的高质量随机对照试验验证结果。

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实验研究

军智I号饮料包对长时连续脑力作业神经行为功能的改善作用研究

chenka

2015, 39(8): 0-0.

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目的：评估本中心研制的军智I号饮料包对长时连续脑力作业神经行为功能的改善作用。方法：选取某军校40名学员为受试者，随机分为对照组（n=20）和干预组（n=20），受试者于测试日进行连续10小时（8:00 ~ 18:00）高强度脑力作业，干预组在14:00服用军智I号，所有受试者于17:00按照WHO规定的测试方法、顺序及分组进行WHO神经行为核心测试组合（Neurobehavioral Core Test Battery，WHO-NCTB）测试及注意广度测试。结果：WHO-NCBT测试发现，长时连续脑力作业后干预组心境状态较对照组稳定，表现为不良情绪得分较低，而正性情绪得分较高；干预组较对照组简单反应时测试平均反应时间缩短、且错误反应次数减少，数字倒序、视觉保留及数字译码、习惯用手提转捷度及目标追踪正确数则明显增加（P＜0.05）。此外，干预组在长时连续脑力作业后注意广度测试正确数也显著高于对照组（P＜0.05）。结论：本中心研制的军智I号饮料包可显著改善长时连续脑力作业后期神经行为功能，具有延缓脑力疲劳产生、保护和增强认知功能的作用。

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实验研究

ALKBH5抑制肝癌细胞系HepG2和肝细胞系L-02的增殖能力

孟冉冉

2015, 39(8): 0-0.

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目的探讨AlkB同源蛋白5(AlkB Homologue 5，ALKBH5)对正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2的增殖、周期、凋亡的影响。方法通过慢病毒稳定转染ALKBH5基因的重组载体（pEGFP-C1b-ALKBH5）至肝癌细胞系HepG2和肝细胞系L-02中，Western blot鉴定GFP-ALKBH5的稳定表达；实验分GFP病毒组和GFP-ALKBH5病毒组；细胞增殖实验（Cell Counting Kit-8，CCK-8）检测两组细胞的增殖能力；流式细胞术检测两组细胞周期和细胞凋亡的情况；平板克隆形成实验检测两组细胞的生长能力。结果与GFP对照组相比，过表达GFP-ALKBH5可以显著抑制HepG2和L-02细胞的增殖，引起HepG2和L-02细胞的周期阻滞，但不影响细胞的凋亡。结论 ALKBH5可显著抑制肝细胞和肝癌细胞的增殖能力，扮演了抑癌基因的角色，可能在肝细胞癌的发生和发展中起重要作用。

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血浆TFPI水平判断重症急性胰腺炎预后的临床价值

宋景春

2015, 39(8): 0-0.

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目的检测急性胰腺炎患者的血浆组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor，TFPI)水平，并评价其判断重症急性胰腺炎预后的临床价值。方法取68名急性胰腺炎患者，包括重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）患者32例，轻型急性胰腺炎（mild acute pancreatitis，MAP）患者36例，另取同期门诊体检者20例为对照，均入院1h内抽血样，收集临床及实验室参数，计算APACHEⅡ评分和Ranson评分，采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血浆TFPI水平。结果 MAP组患者血浆TFPI浓度（3026.81±465.76）pg/ml较对照组明显升高（2468.73±262.39）pg/ml(P<0.05)， SAP患者的血浆TFPI浓度（4274.25±639.83）pg/ml较MAP组明显升高 (P<0.05)。相关分析显示AP患者的血浆TFPI水平与WBC、AST、ALT、TBIL、Cr、PT、APTT、PCT、APACHEⅡ评分和Ranson评分呈显著正相关（P<0.05），与PLT呈显著负相关（P<0.05）。ROC曲线图分析显示。血浆TFPI水平诊断重型急性胰腺炎发生的价值AUCSAP =0.902, 95%CI=0.845~0.959（P<0.05）。结论急性胰腺炎患者的血浆TFPI水平明显升高，重症急性胰腺炎更显著，可用于判断重症急性胰腺炎的预后。

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实验研究；临床观察

慢性丙型肝炎患者外周血CD4+ CD25+ 调节性T 细胞与病毒载量和肝功能损害的相关性研究

jialiu

2015, 39(8): 0-0.

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【摘要】目的研究慢性丙型肝炎患者外周血CD4+ CD25+调节性T 细胞与HCV-RNA载量和ALT水平的相关性。方法流式细胞术计数66例慢性丙型肝炎患者和30例健康对照者外周血CD4+ CD25+调节性T 细胞，实时荧光PCR检测HCV-RNA载量，乳酸脱氢酶法检测ALT浓度。结果慢性丙型肝炎患者外周血CD4+ CD25+调节性T 细胞显著高于健康对照组（t=6.652，P<0.01）。且随着HCV-RNA 载量增高，患者外周血中CD4+ CD25+调节性T 细胞含量逐渐升高(t=39.97，P<0.001)。CD4+ CD25+调节性T 细胞与HCV-RNA载量取对数后呈正相关(r = 0.588，P<0.01)，与 ALT 水平呈正相关 (r =0.306，P<0. 01)。结论慢性丙型肝炎患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞显著升高，与HCV-RNA载量和ALT的升高相关性具有统计学意义。提示CD4+ CD25+调节性T细胞可能参与丙型肝炎的进展，为丙型肝炎的诊疗研究提供了新的思路。

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综述

开角型青光眼病情进展的评价

郑亚洁,高鹰,潘英姿

2015, 39(8): 0-0.

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在我国,开角型青光眼发病率的逐年增加,日益受到眼科工作者的重视.评估开角型青光眼患者的病情进展方法众多,主要分为功能评价和结构评价.本文就这两类评价方法进行综述.

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