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    JinCheng,GuorongDan,YuanpengZhao,JianWang,FengYe,JiqingZhao,ZhongminZou
    2015, 39(7): 0-0.
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    神经性毒剂除了在早期抑制乙酰胆碱酯酶外,也导致长期的进行性神经炎和迟发神经退行性病变。近年来,美国国立卫生研究院资助了多项神经性毒剂中毒机制和治疗药物的研究,旨在快速高效对抗神经性毒剂急性中毒及远后效应。正在研制的治疗药物主要包括AChE靶向药物、广谱重活化剂和生物清除剂、抗炎及神经保护药。
  • 实验研究
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    任真真
    2015, 39(7): 0-0.
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    [摘要]:目的 测定慢性肾脏病(chronic kidney disease CKD)患者血清马尿酸(hippuric acid HA)、硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate IS)、硫酸对甲酚(p-cresyl sulfate PCS)及3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2-furanpropionic acid CMPF)4种蛋白结合类毒素的水平,评估肾功能与蛋白结合类毒素水平之间的相关性。方法 将112例CKD患者依据肾功能分为CKD3-5期3组,另外选取60例健康志愿者作为对照组。应用HPLS-MS/MS检测技术测定各组血清中HA、IS、PCS、CMPF的浓度,并对eGFR与4种毒素浓度之间进行相关分析。结果 与健康对照组相比,CKD患者体内HA、IS、PCS及CMPF浓度均明显升高(P<0.01)。CKD3-5期,HA、IS、PCS的水平随肾功能下降出现明显升高(P<0.01),而CMPF血清浓度无显著变化(P>0.05)。eGFR与HA、IS、PCS及CMPF之间决定系数R2分别为0.601、0.633、0.529、0.172。结论 CKD患者体内HA、IS、PCS及CMPF水平均高于健康对照组,其中HA、IS、PCS的浓度随肾功能降低而逐渐升高,但CMPF浓度随肾功能进展改变不大。肾功能降低可导致CKD患者体内HA、IS、PCS水平升高,但对CMPF水平影响较小。
  • 综述
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    刘鸿博,李浩,邱少富,宋宏彬
    2015, 39(7): 0-0.
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    原核生物免疫噬菌体入侵的防御机制与哺乳类免疫机制有很多相似之处。尤其在特异性免疫机制上,原核生物的特异性免疫系统即成簇的规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)与哺乳类特异性免疫系统在很多环节体现了相似的规律。通过比较,我们对CRISPR的免疫功能有了新的认识。近年发现,除了发挥特异性免疫功能,CRISPR系统还参与了许多细菌生长代谢过程的调控机制,调控基因表达的能力更是受到广泛的关注。CRISPR系统功能的复杂程度远远超出免疫机制的范畴,尚未得到充分的认识,值得深入研究。
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    阚乃鹏
    2015, 39(7): 0-0.
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    目的:在大肠杆菌基因组中筛选可用于TNT检测的基因传感元件。 方法:利用随机酶切方法切碎大肠杆菌K-12 MG1655基因组,构建基因组启动子文库,通过多轮筛选法获得可感应TNT的文库元件。通过数据库分析,并在灵敏度、特异性、起效时间各方面对新的传感元件在TNT诱导下的启动活性进行考察,进一步确证了文库元件中发挥作用的功能序列。 结果和结论:成功构建了大肠杆菌K-12 MG1655基因组启动子文库,并从中筛选得到了一个可感应TNT的文库元件,经过进一步分析确证了其发挥功能的序列topAp4,并在灵敏度、特异性、起效时间上都表现出了较好的启动活性。上述研究工作首次发现了topAp4对TNT的感应作用,并验证了其具有较好的启动活性,为TNT检测生物传感器的构建打下了良好的基础。
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    张琦
    2015, 39(7): 0-0.
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    摘要 目的:建立一种操作简单、稳定可靠的肾癌及膀胱癌原位癌模型,并运用于抗癌药效评价工作。方法:将人肾癌肿瘤组织块穿刺接种到肾实质组织中,建立肾癌原位肿瘤模型;用留置针机械摩擦损伤膀胱粘膜,及随后用人膀胱癌细胞悬液暴露法,建立膀胱癌原位肿瘤模型。通过小动物B超和荷瘤组织的HE染色确定建立可靠性,并采用该模型对硝羟喹啉(Nitroxoline,NTX)的体内抗肿瘤药效进行了初步药效评价。结果:术后两周通过B超可见肿瘤发生;组织病理HE染色显示肾癌原位模型肿瘤呈现浸润性生长,膀胱癌模型可见明显突向膀胱腔的癌组织团块。硝羟喹啉体内药效评价中,60mg/kg 硝羟喹啉对肾癌原位肿瘤抑制率为57.5%。30mg/kg 硝羟喹啉对膀胱癌原位肿瘤抑制率为48.8%。结论:利用上述方法建立的肾癌及膀胱癌原位肿瘤模型简单、实用,是评价治疗肾癌和膀胱癌的抗癌药物可靠方法。
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    黄薇
    2015, 39(7): 0-0.
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    目的 探讨合并血管并发症的2型糖尿病患者血浆一氧化氮和内皮素水平的变化,并分析两者与各危险因素间的关系。方法 入选2型糖尿病患者98例,根据分组条件分为糖尿病合并血管并发症组(49例),糖尿病无血管并发症组(49例),同期选择年龄、体重指数相匹配的健康对照44例。所有受试者记录身高、体重、血压、病程,抽血检测空腹血糖、HbA1c、血脂各项,以及血浆一氧化氮(NO)和内皮素(ET-1)水平。结果 与健康对照组比较,糖尿病两组的NO水平均显著降低(43.87±12.05 umol/L和53.29±11.75 umol/L 对比66.08±16.48 umol/L ,p<0.01),而ET-1水平显著升高(100.25±20.34 ng/L和77.55±14.84 ng/L对比53.62±8.40 ng/L,p<0.01)。有血管并发症组NO水平显著低于无并发症组(43.87±12.05 umol/L 对比53.29±11.75 umol/L ,p<0.01),而ET-1水平显著高于无并发症组(100.25±20.34 ng/L 对比77.55±14.84 ng/L ,p<0.01)。在糖尿病两组之间,收缩压、舒张压、HbA1c及病程,有并发症组明显高于无并发症组(p<0.01)。相关分析显示,舒张压、收缩压、空腹血糖、HbA1c与NO之间存在负相关;HDL-C与NO之间存在正相关。HDL-C与ET-1存在负相关;收缩压、LDL-C、血尿酸、空腹血糖、HbA1c与ET-1之间存在正相关。结论 糖尿病患者血浆一氧化氮和内皮素水平明显异常,存在血管内皮功能损伤,有血管并发症者损伤更严重;且与血糖、血压、血脂的控制水平具有相关性。
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    赵岳
    2015, 39(7): 0-0.
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    [摘要] 目的 研究辛二酰苯胺异羟肟酸( suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA) 与紫杉醇( paclitaxel,PTX)联合应用对人卵巢癌细胞 OC3杀伤及自噬的影响,探讨两药联合是否具有协同作用。方法 利用SAHA和/或PTX处理OC3细胞后,倒置显微镜下观察细胞形态;四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞的生长状态; AO/EB 双染色观察细胞是否出现自噬泡,析因方差法与金式公式法分析联合用药效果。结果 SAHA和PTX单独或联合用药处理后,倒置显微镜下可见联合用药组细胞形态较单独用药组发生显著改变,细胞大部分出现折光率差和死亡的现象; MTT 法检测细胞增殖结果表明,联合用药组较单独用药组显著抑制 OC3 细胞的增殖与存活 ( P<0.05) ;析因方差分析显示,两药存在正交互作用,金式公式计算表明两药具有协同效应; AO/EB 双染色发现各组细胞出现自噬现象,且联合用药组诱导自噬的发生比率显著高于单独用药组。结论 SAHA 联合PTX 对人卵巢癌细胞 OC3具有明显的协同杀伤作用,并可诱导其发生自噬。
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    朱杰
    2015, 39(7): 0-0.
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    [摘要] 目的:构建DEK基因的RNAi慢病毒表达载体,并对其生物学功能进行初步检测。方法:采用RNAi干扰技术,根据DEK基因的序列,确定其有效靶序列,合成DEK基因的Oligo DNA,退火形成双链DNA,将其克隆到经BamHI与EcoRI酶切后的siRNA表达载体PSIH-H1上,产生PSIH-H1-DEK慢病毒载体,筛选阳性克隆并测序鉴定。与3个包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒后感染乳腺癌细胞ZR75-1,经Puro(嘌呤霉素)筛选2周后,收集部分细胞利用Realtime-PCR和Western blot分别检验DEK在mRNA和蛋白水平的敲低效果,并通过细胞生长实验来检测DEK对人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞生长的影响。结果:PCR和DNA测序结果证实DEK siRNA慢病毒表达载体PSIH-H1-DEK构建成功。RT-PCR和Western blot结果显示,构建的DEK siRNA可有效抑制DEK基因的表达,并由此建立了敲低DEK的稳定克隆。生长曲线实验表明,DEK siRNA可抑制人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞的生长。结论:成功构建了DEK基因的RNAi慢病毒表达载体,感染人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞后,有效沉默了ZR75-1细胞中的DEK基因的表达,为进一步研究DEK基因在乳腺癌中的作用奠定基础。  Construction and functional characterization of a lentiviral vector  mediating RNA interference of DEK gene    ZHU Jie1Δ,LIU Jie2Δ,DING Li-hua1,HE Ronghua2,ZHANG ya-nan2,LUO Xiao-Li2,YE Qi-Nong2*,LV Zhao-Hui 1* 1Department of endocrinology,Chinese PLA General hospital,Beijing 100853; 2Beijing Institute of Biotechnology, Beijing 100850;China Corresponding author: LV Zhao-Hui, E-mail:metabolism301@126.com; YE Qi-Nong,E-mai:yeqn66@yahoo.com [Abstract] Objective:To construct the lentiviral vector of RNA interference(RNAi) for DEK,and to detect its effect on breast cancer cell growth.Methods:The DEK siRNA was designed and constructed based on DEK sequence using a lentiviral vector.The lentivirul vector containing DEK siRNA was named PSIH-H1-DEK,which was confirmed by PCR and sequenceing.PSIH-H1-DEK was then packaged with accessory plasmids into lentivirus in 293T cells and selected for 2 weeks with puromycin and the mixed colonies stably expressing DEK siRNA were obtained and the DEK expression was detected by QPCR and Western blot.The effect of DEK siRNA on ZR75-1 cell growth was determined by cell counting kit.Results:Western blot and qPCR showed that PSIH-H1-DEK siRNA could suppress DEK gene expression.Suppression of DEK could markedly inhibited the  growth of ZR75-1 cells.Conclusion:The lentivirus-mediated DEK siRNA were obtained,which  lays the foundation for further research on DEK function in breast cancer development.
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    MaJie
    2015, 39(7): 0-0.
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    肠道病毒71型(EV71)是引起儿童手足口病的主要病原体之一,其感染可在少数患者中引起严重的神经系统综合征甚至导致死亡。自20世纪90年代后期在东南亚地区暴发以来,EV71感染已成为严重威胁全球,尤其是亚太地区儿童健康的公共卫生问题之一。尽管目前临床上尚无针对EV71的安全有效的疫苗,但多个灭活疫苗已进入或完成临床研究,减毒活疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗等新型疫苗也显示出良好的发展前景,本文对EV71疫苗的最新研究进展进行综述。
  • 实验研究
  • 实验研究
    何莎
    2015, 39(7): 0-0.
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    目的 基于基因芯片技术建立一种能快速甄别粪肠球菌、屎肠球菌及万古霉素耐药基因的检测方法。方法 根据GenBank中查找的2种常见肠球菌特异性基因序列(ddl)及万古霉素耐药基因(vanA,vanB)序列,设计与合成用于检测肠球菌的特异性基因及耐药基因的引物和探针,制备耐万古霉素肠球菌检测基因芯片。利用多重不对称PCR法扩增样品中的特异性基因与耐药基因片段,标记产物与基因芯片上的探针杂交,经清洗、化学发光法显色后进行结果分析。在优化的多重PCR体系、杂交反应和化学发光法检测条件下,评价芯片的特异性、灵敏性和重复性。结果 共筛选出1对通用引物、4对特异性引物和1条细菌通用探针、4条特异性检测探针。该芯片具有良好的特异性和重复性,灵敏性可达103CFU/ml。10例临床分离株样本的芯片检测结果与药敏实验基本一致(9/10)。结论 初步建立了检测耐万古霉素肠球菌的基因芯片方法,利用此方法可以甄别2种耐万古霉素肠球菌种类并检测其耐药基因。
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    翟华立
    2015, 39(7): 0-0.
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    【摘要】 目的:急性肝衰竭是目前临床上导致死亡的重要病因之一,研究具有肝特异性、灵敏度高的肝损伤标志物对于严重肝病的早期诊断以及预后预测具有重要的意义。肝活素Hepassocin(HPS) 是一种具有高度组织特异性的促肝细胞增殖活性因子,在动物水平检测其在血清中的表达水平与肝损伤程度的相关性将为其开发成用于临床检测急性肝损伤的特异性标志物奠定基础。方法:利用腹腔注射不同剂量CCl4处理诱导小鼠急性肝损伤模型,检测小鼠的存活率、转氨酶水平、以及肝脏病理变化。通过ELISA检测小鼠血清的HPS水平;Real time PCR法检测HPS mRNA水平;Western blot 实验检测HPS的蛋白表达水平。结果:随着CCl4处理剂量的增加,小鼠死亡率显著升高,肝损伤程度显著增加,在此过程中,HPS在小鼠血清及肝组织中的表达水平也显著上调,并与肝损伤程度密切相关。结论:HPS可以做为一种新的小鼠肝损伤标志物。
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    赵一博
    2015, 39(7): 0-0.
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    目的:探讨超声及超声引导下空心针穿刺活检(Ultrasound-guided core needle biopsy,UNB)在判断乳腺癌腋窝淋巴结转移中的临床应用价值。方法:回顾性分析2008年6月~2014年8月期间我院连续收治454例乳腺癌,超声判断腋窝淋巴结异常行UNB患者临床资料,其中354例行新辅助化疗;100例腋窝淋巴结UNB后行手术治疗,评价超声及UNB判断乳腺癌腋窝淋巴结转移的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值及假阴性率。结果:454例超声影像学腋窝淋巴结异常乳腺癌患者UNB转移率为70.9%,阴性率为29.1%;100例腋窝淋巴结UNB后行手术治疗患者转移率为25%;13例“淋巴结纵横比(L/T)≤1.5且淋巴结长径>1cm”患者转移率为92.3%;UNB判断乳腺癌腋窝淋巴结转移的敏感性为64.1%、特异性为100%、准确性为86%、阳性预测值为100%、阴性预测值为81.3%、假阴性率为18.7%;UNB判断结果与术后病理诊断结果的一致性较好,Kappa值=0.685;其中UNB取材2针与3针的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值、假阴性率分别为50%与77.8%、100%与100%、77.8%与92.5%、100%与100%、71.4%与89.7%、28.6%与10.3%,UNB取材3针相比2针与术后病理一致性分析:Kappa值0.822/0.526。结论:超声判断乳腺癌腋窝淋巴结转移具有一定的临床价值;UNB可以准确判断腋窝淋巴结转移状态;UNB取材3针相比2针有更高的准确性。
  • 实验研究
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    方贤磊
    2015, 39(7): 0-0.
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    目的 探讨肺功能分析在放射性肺损伤防治药物药效研究中的意义。方法 采用30只C57BL/6小鼠以20Gy的 X线行小鼠胸部单次照射,照射后给予地塞米松(给药组按照4.5mg/kg/d的剂量给予地塞米松磷酸钠注射液,两周后减半维持至1m),对照组和模型组给予等体积生理盐水。照射后1月,使用EMKA肺功能分析系统在清醒状态下行肺功能测试,随后活杀取材,HE染色观察肺组织结构变化,应用Image-pro图像分析软件分析肺泡腔面积。结果 给药1月后,模型组及地塞米松组小鼠肺功能部分指标如50%呼气流量、每分通气量、呼气峰值、吸气峰值、潮气量较对照组明显降低,但地塞米松组较模型组降低程度有所减轻。肺组织病理变化示地塞米松组小鼠肺泡腔面积减小程度、肺间质中性粒细胞浸润程度均较模型组有所减轻,与肺功能分析结果相符。结论 地塞米松对放射性肺损伤具有一定治疗效果;肺功能分析与肺组织病理变化相结合印证,可以有效评价放射性肺损伤防治药物的药效。
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    徐辰,姜颖,魏汉东
    2015, 39(7): 0-0.
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    目的 探索布美他尼在抑制肿瘤细胞增殖中的应用。方法 采用免疫印迹杂交技术,验证不同肿瘤细胞中钠钾氯协同转运蛋白1(NKCC1)的表达情况;运用CCK-8法,测定布美他尼对不同肿瘤细胞的IC50值。结果 肺癌细胞系(A549),结直肠癌细胞系(HCT116)中靶蛋白NKCC1表达量显著高于慢性髓原白血病细胞系(K562),食管癌细胞系(Eca109),宫颈癌细胞系(Hela),T淋巴细胞白血病细胞系(Jurkat)和乳腺癌细胞系(MCF7);布美他尼对肺癌细胞系(A549),结直肠癌细胞系(HCT116)的IC50值明显低于慢性粒细胞性白血病细胞系(K562),食管癌细胞系(Eca109),宫颈癌细胞系(Hela),T淋巴细胞白血病细胞系(Jurkat)和乳腺癌细胞系(MCF7),且其抑制率与靶蛋白NKCC1的表达量呈正相关。结论 布美他尼能抑制肿瘤细胞增殖,NKCC1可作为潜在的抗肿瘤药物作用靶点。
  • 实验研究
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    曾瑜亮,肖艳华,田瑛,董俊兴
    2015, 39(7): 0-0.
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    目的 研究大红袍Radix Campylotropis hirtella根的化学成分。方法 利用重结晶、硅胶柱色谱、ODS、Sephadex LH-20等色谱技术对大红袍60%乙醇提取物进行分离纯化,并通过理化性质和波谱数据对化合物进行结构鉴定。结果 分离得到9个化合物,分别鉴定为Hedysarimcoumestan I(1),isotrifoliol(2),红花岩黄芪香豆雌酚B(3),伞形花内酯(4),香豌豆酚(5),槲皮素(6),(+)儿茶素(7山奈酚(8),二氢山奈酚(9)。结论 化合物1为新化合物,化合物3~5首次从该植物中分离得到。