军事医学

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综述

小肠胆固醇吸收相关蛋白的研究进展

袁敏

2015, 39(6): 0-0.

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［摘要］多种蛋白参与了小肠胆固醇的吸收，其中NPC1L1（Niemann-Pick C1 Like 1）蛋白主要介导小肠对胆固醇的吸收，小肠吸收的游离胆固醇在酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶2( acyl-coenzyme A (CoA):cholesterol acyltransferase 2 ACAT2)的催化下形成胆固醇酯并经淋巴液进入血液循环，而未被酯化的胆固醇则通过转运蛋白ABCG5/ABCG8（ATP-binding cassette(ABC) transporters G5/G8）分泌入肠腔，在胆固醇吸收过程中一些转录因子发挥了重要的调节作用。

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实验研究

长链非编码RNA HOTTIP对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

刘芳,张欢,吴晓洁,郗永义,周艳荣,陈红星,林艳丽

2015, 39(6): 0-0.

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目的：研究长链非编码RNA（long non-coding RNA , lncRNA）HOTTIP（HOXA末端转录本反义RNA，HOXA transcript at the distal tip）对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法：将HOTTIP siRNA及negative siRNA 转染Hela及C-33A宫颈癌细胞系，通过q-PCR技术确认HOTTIP在细胞中表达水平的敲低，采用CCK8及克隆形成实验检测HOTTIP降低表达后对Hela及C-33A细胞增殖的影响，采用细胞划痕实验检测HOTTIP降低表达后对Hela及C-33A细胞增殖及迁移能力的影响，采用Matrigel细胞侵袭实验检测HOTTIP降低表达后对Hela及C-33A侵袭能力的影响。结果：向宫颈癌细胞系Hela和C-33A中转染HOTTIP siRNA 48h后，经q-PCR检测Hela及C-33A细胞中HOTTIP均出现明显下调；CCK8及克隆形成实验结果显示，HOTTIP降低表达能显著抑制Hela及C-33A细胞的增殖（P＜0.01）；细胞划痕实验结果显示，HOTTIP降低表达能减弱Hela及C-33A细胞增殖及迁移能力；Matrigel细胞侵袭实验结果显示，HOTTIP降低表达能减弱Hela及C-33A侵袭能力。结论：HOTTIP siRNA转染Hela及C-33A宫颈癌细胞系能有效降低HOTTIP的表达，同时HOTTIP降低表达后能抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

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靶细胞表面HCV受体分子排列顺序对病毒入侵影响的研究

康琼

2015, 39(6): 0-0.

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[摘要]目的通过在小鼠肝癌细胞表面串联表达HCV 受体分子，在二维结构的基础上研究HCV受体分子的排列顺序对病毒入侵影响，为研究HCV的早期感染机制奠定基础。方法将构建好的慢病毒表达载体pCDH-hLDLR-hSR-BI-hCD81-GFP、pCDH-hLDLR-hCD81-hSR-BI和pCDH-hCLDN-1-hOCLN-DsRed与包装质粒共转染包装细胞293FT，包装慢病毒，用收集浓缩的慢病毒攻击小鼠肝癌细胞系Hepa1-6，用抗生素G418加压筛选得到串联表达人紧密链接区域分子CLDN-1和OCLN的转基因细胞株hCLDN-1-OCLN/Hepa1-6（CO/Hepa1-6）；用重组慢病毒pCDH-hLDLR-hSR-BI-hCD81-GFP和pCDH-hLDLR-hCD81-hSR-BI攻击转基因细胞株CO/Hepa1-6，通过嘌呤霉素puro和G418双抗加压及流式细胞术，最终筛选获得五种分子hLDLR、hSR-BI、hCD81、hCLDN-1和hOCLN共表达且具有不同受体排列顺序的转基因人源化小鼠肝癌细胞株LSCCO/Hepa1-6和LCSCO/Hepa1-6；利用HCV阳性血清直接感染方法分析LSCCO/Hepa1-6和LCSCO/Hepa1-6对 HCV的易感性，研究HCV受体分子的排列顺序对病毒入侵影响。结果两种细胞株LSCCO/Hepa1-6和LCSCO/Hepa1-6对HCV结合均有增加，但LSCCO/Hepa1-6细胞株细胞表面的HCV受体排列顺序更有利于HCV入侵。结论在二维结构的基础上，HCV在感染早期要优先与B族I型清道夫受体SR-BI作用。 [关键词]HCV；转基因细胞株；HCV受体分子

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ROS影响有丝分裂时期细胞内线粒体的形态及分布

白圆圆

2015, 39(6): 0-0.

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[摘要] 目的利用稳定表达线粒体荧光信号的细胞系检测ROS（Reactive oxygen species）对有丝分裂时期细胞的线粒体形态及分布的影响。方法构建表达线粒体荧光信号的病毒表达载体，经测序鉴定和Western-Blot检测正确后，通过病毒包装及感染的方法构建稳定表达线粒体荧光信号的Hela s3细胞系Hela s3-COX4tp-EGFP; 进一步用免疫荧光的方法观察线粒体在ROS影响下形态及分布的变化。结果成功构建表达线粒体荧光信号的病毒表达载体及稳定细胞系，通过激光共聚焦显微镜观察，发现H2O2处理能显著影响有丝分裂时期细胞线粒体的形态及分布。结论本研究初步证明ROS可以影响线粒体有丝分裂时期的形态及分布，为后续研究线粒体功能与细胞有丝分裂的调控奠定基础。

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EDAG敲除小鼠对低剂量辐射损伤敏感性的研究

潘婷婷

2015, 39(6): 0-0.

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目的构建EDAG敲除小鼠并研究EDAG敲除小鼠对低剂量辐射损伤的敏感性。方法利用锌指核酸酶技术（ZFNs)建立EDAG敲除小鼠模型；通过外周血细胞计数，骨髓细胞的DNA损伤和集落形成能力来评价低剂量辐射损伤。X射线照射后第1，3，5，7天称重并进行血常规检测；照射后第3天分离小鼠骨髓细胞，利用免疫荧光实验检测DNA损伤标志物p-H2A.x的表达水平；照射后第5天分离小鼠骨髓细胞，接种集落并于7天后进行集落计数。结果与结论成功建立了EDAG敲除小鼠模型，并发现EDAG敲除小鼠对低剂量辐射诱导的损伤更加敏感，表现为血细胞数量减少，骨髓细胞成集落能力下降，DNA突变增加。表明EDAG敲除小鼠作为一种对辐射高度敏感的动物模型，可作为低剂量辐射损伤生物学效应评价的有力工具。

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佐匹克隆导致呼吸抑制1例

韩锐

2015, 39(6): 0-0.

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佐匹克隆；呼吸抑制；不良反应

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实验研究

H7N9流感病毒血凝素HA在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析

王莎

2015, 39(6): 0-0.

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[摘要] 目的利用毕赤酵母表达制备H7N9流感病毒血凝素HA(1-525aa），并对其免疫原性进行研究。方法经全基因合成获得H7N9流感病毒(A/Hangzhou/1/2013(H7N9))全长血凝素HA，以其为模板，PCR得到片段HA1-525，通过Nsp V和Not I双酶切连入pPICZαA载体，转入毕赤酵母X33，ELISA筛选阳性克隆。发酵培养后，表达上清经PEG20000沉淀获取HA1-525，并用糖苷酶内切酶 H（endo H）酶切分析其N-糖链。将制备的HA1-525免疫Balb/c小鼠，经ELISA检测特异性HA7抗体滴度，红细胞凝集抑制实验分析血抑活性。结果培养上清用抗HA7的抗体经ELISA检测，重组菌成功表达HA7，且western发现有特异性弥散条带，经糖苷酶endo H 酶切后，HA1-525为均一的条带，分子量约58×103Da，与理论大小相当，表明HA1-525存在甘露糖基化结构。HA1-525两次免疫小鼠后可产生1:36000的抗体滴度。以H7N9裂解苗为抗原，检测其血抑活性为1:700。结论利用毕赤酵母表达的H7N9流感病毒血凝素HA1-525可以诱导小鼠产生针对HA7的中和抗体。

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SIRT1在血管相关性疾病中的研究进展

高瞻,哈小琴,王立生

2015, 39(6): 0-0.

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组蛋白去乙酰化酶1（SIRT1）是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）的去乙酰化酶，其可对组蛋白和非组蛋白发挥去乙酰化作用从而参与能量调节、代谢、衰老及凋亡等众多生命学过程的调节。在许多血管相关性疾病中，SIRT1通过对相关因子去乙酰化增加细胞能量供应、减少细胞凋亡、减轻炎症反应、抵抗氧化应激、改善血管内皮细胞功能，从而在血管相关性疾病中发挥重要作用。本文旨在对SIRT1在缺血性脑卒中、动脉粥样硬化及肿瘤这三大常见血管相关性疾病中的作用的研究进展及相应的信号通路进行综述。

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实验研究

Poly(A)加尾-RNaseH消化-RT-PCR法分析应激诱导生成5'端tRNA半分子

刘荻,付汉江,刘继来,朱捷,郑晓飞

2015, 39(6): 0-0.

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[摘要] 目的建立一种简便、快速检测应激诱导细胞生成的5'端tRNA半分子的方法。方法提取应激诱导细胞RNA，用poly(A)加尾酶在RNA分子3'端加尾后，加入与待测tRNA的3'端部分序列互补的简并DNA探针杂交，经RNase H消化与DNA探针互补的tRNA序列，再由oligo(dT)n锚定引物进行反转录获得cDNA，以5' 端tRNA半分子和锚定引物的序列为PCR反应的上下游引物，PCR扩增检测5'端tRNA半分子。结果经Poly(A)加尾-RNaseH消化-RT-PCR-电泳等步骤，可以实现对5'端tRNA半分子的检测分析。结论Poly(A)加尾-RNaseH消化-RT-PCR法的建立实现了5'端tRNA半分子的简便、快速检测分析，为tRNA半分子生物学功能研究和检测分析提供了工具。

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免疫调节剂甲氨蝶呤在I型糖尿病治疗中的应用

运松,奚永志

2015, 39(6): 0-0.

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I型糖尿病（IDDM/T1DM）又称胰岛素依赖型糖尿病, 是一种严重危害人类健康和生命安全的难治性代谢性疾病。从其发病机制的角度讲，它亦归属于自身免疫性疾病范畴。新近国际学术界还将其定义为重要自身免疫性疾病（important autoimmune diseases,IAIDs)中的一类。IDDM/T1DM最突出的病理生理特征是机体同时产生异常的自身体液和细胞免疫应答，最终导致胰岛β细胞损伤破坏，胰岛素分泌量绝对性减少。因此，针对IDDM/T1DM的传统主流治疗策略始终是采用胰岛素或胰岛素类似物的长期补充疗法。然而，长期使用常常会带来诸多的毒副作用尤其是低血糖反应或低血糖昏迷以及胰岛素抗性等。近年来针对其发病新机理所采用免疫抑制剂或免疫调节剂甲氨蝶呤（methotrexate,MTX）的临床应用十分惹人关注，这将成为老药新用的又一重要范例。

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实验研究

石榴籽油抑制乳腺癌细胞恶性生物学行为的研究

付国强

2015, 39(6): 0-0.

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目的：本文主要研究石榴籽油抑制乳腺癌细胞恶性生物学的行为。方法：本研究使用气相色谱法检测脂肪酸组成成分；使用乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231两种细胞系进行干预，采用MMT法观察细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡情况，使用Western blot技术检测细胞内相关增殖、凋亡蛋白的表达情况。结果：石榴籽油中主要的脂肪酸为石榴酸（74.41%）；石榴籽油能够抑制两种乳腺癌细胞系的增殖作用，显著导致其细胞凋亡，与对照组相比具有显著性差异；石榴籽油可显著下调细胞中Cox-2、Bcl-2的表达水平，上调Bax、Caspase-3（cleaved）的表达水平，上调MCF-7中P53的表达水平或下调在MDA-MB-231中的表达水平。结论：石榴籽油中的石榴酸可能是抑制乳腺癌细胞恶性生物学行为的功能性物质，石榴籽油抑制乳腺癌细胞增殖活性，促进其凋亡作用可能是通过调节细胞中Cox-2、Bcl-2、Bax、Caspase-3（cleaved）以及P53的表达来实现的。

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PPARβ激动剂对肥大心肌细胞蛋白合成及IL-1β表达的影响

shengli

2015, 39(6): 0-0.

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目的探讨过氧化物酶体增殖物活化型受体β亚型（PPARβ）激动剂，对体外肥大心肌细胞蛋白合成及相关炎性因子IL-1β表达的影响。方法体外培养新生大鼠的心室肌细胞，以血管紧张素II（Ang II）诱导建立心肌细胞肥大模型，将合适浓度PPARβ激动剂GW0742作用于心肌细胞，用3H-亮氨酸掺入法检测心肌细胞蛋白合成速率，使用RT-PCR及western-blot方法分别检测IL-1β mRNA和蛋白水平的表达变化。结果 GW0742在抑制肥大心肌细胞蛋白合成速率的同时，下调其IL-1β的过度表达，而作为溶剂的DMSO则无此影响。结论 GW0742抑制AngII介导的体外心肌细胞肥大，其机制可能与调控炎性因子IL-1β密切相关。

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