军事医学

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急性和慢性髓性白血病细胞中可变剪接事件的识别

郑芳芳,姜敏,何涛

2015, 39(5): 0-0.

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摘要目的白血病是造血系统的一种恶性疾病，在我国35岁以下恶性肿瘤患者死亡率中居首位。白血病治疗在近20年来已经取得很大进展，但部分仍无法治愈。更加有效的药物开发需要进一步揭示白血病复杂的分子机制。可变剪接是产生蛋白质多样性的重要机制，越来越多的证据表明异常剪接在肿瘤中发挥重要作用。方法基于慢性髓性白血病（K562）和急性髓性白血病（HL-60、THP1）细胞的全转录组测序数据在全基因组范围内采用TopHat、MATS和Cufflinks计算识别可变剪接事件、重构剪接异构体和分析其差异表达。结果在急性与慢性髓性白血病细胞间识别130个基因在CML细胞系中特异高表达， 80个基因在AML两株细胞系内均表达上调。在CML与AML之间识别了337个差异表达的剪接异构体以及35个差异可变剪接事件。结论本研究结果表明AML与CML细胞系间存在显著差异的可变剪接事件和剪接异构体。白血病相关的可变剪接事件可作为其潜在的标记物或药物靶标。

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综述

高危生物污染环境下正压生物防护服使用风险研究的现状、问题及启示

王润泽

2015, 39(5): 0-0.

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人员穿着正压生物防护服在高危生物污染环境中作业时可能面临一些潜在的安全风险，这些风险可以通过模拟实验进行评估并有效规避。本文从防护服的动态检测方法、使用风险评估两方面综述了国内外的相关研究现状，提出了尚需解决的问题以及未来的发展方向。

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实验研究

鼠疫耶尔森氏菌201株和201∆pCD1株蛋白表达谱比较研究

刘红胜hongsheng

2015, 39(5): 0-0.

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[摘要] 目的分析缺失编码Ⅲ型分泌系统的大质粒pCD1对鼠疫耶尔森氏菌蛋白质表达谱的影响，探索鼠疫耶尔森菌的潜在致病机理，为鼠疫疫苗研制提供新线索。方法通过双向电泳与质谱分析相结合的方法，比较鼠疫菌在26°C和37°C不同培养温度下，全菌蛋白表达谱差异，鉴定差异蛋白并对其功能进行初步分析。结果成功分离并鉴定了鼠疫耶尔森氏菌201株和201 ∆pCD1缺失突变株中的差异蛋白，其中26°C条件下鉴定到29个差异蛋白，37°C条件下鉴定到25个差异蛋白，其中包含7个由pCD1质粒编码的蛋白。结论通过比较蛋白质组学研究，发现大质粒pCD1缺失后，多种染色体编码蛋白的丰度发生了显著变化，暗示大质粒能够调控染色体编码基因的表达。

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实验研究

PM2.5通过活化NF-қB途径诱导支气管上皮细胞中VEGF表达

刘莎莎

2015, 39(5): 0-0.

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目的：探讨PM2.5诱导支气管上皮细胞（Beas-2B）表达VEGF的分子机制。方法：PM2.5粉末溶解于DMEM培养基中，倍比稀释成不同浓度（0、12.5、25、50、100μg/mL）的溶液，超声30min后加入血清及双抗（链霉素和青霉素），使终浓度为2%血清的体系，刺激人支气管上皮细胞；双荧光素酶基因报道系统检测NF-қB活化水平和vegf基因启动子的转录活化水平；Western-blotting方法检测NF-қB组成亚基p65磷酸化水平、阻遏蛋白IkBα及VEGF蛋白表达水平。结果：PM2.5呈剂量依赖性诱导Beas-2B细胞VEGF表达；PM2.5诱导Beas-2B细胞中NF-қB活化，在浓度为100μg/mL活化强度最高，阻遏蛋白IkBα降解和p65亚基磷酸化水平升高；抑制NF-қBp65亚基表达后Beas-2B细胞VEGF蛋白表达水平下调，vegf基因启动子的转录活化水平下降。结论：PM2.5通过活化NF-қB途径诱导支气管上皮细胞中VEGF表达。

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xCT调节乳腺癌细胞转移的作用机制研究

乔海晅

2015, 39(5): 0-0.

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目的 xCT是氨基酸转运系统（system xc-）的功能性亚基，在多种恶性肿瘤中高表达，我们在前期研究中也发现xCT在乳腺癌、肝癌和黑色素瘤中高表达，但xCT在乳腺癌发生发展过程中的作用机制还不清楚，因此我们在前期工作的基础上探讨xCT调节人类乳腺癌细胞MDA-MB-231转移的作用及其机制。方法细胞划痕实验和Transwell实验分析xCT受到抑制后，人类高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移及侵袭能力的改变。Western Blot 和RT-PCR检测人类高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231在xCT抑制剂SASP(柳氮磺吡啶)的作用下，其自噬相关标志物LC3，EMT（上皮细胞间质化）过程相关标志物E-cadherin、Vimentin以及在EMT过程中起关键作用的转录因子Snail表达水平的改变。结果 SASP处理过的人类高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231与对照组相比，EMT的标志物E-cadherin表达升高，Vimentin表达降低，转录因子Snail的蛋白表达水平降低，但其 mRNA水平却没有明显变化，自噬相关蛋白LC3-II／LC3-I的比值升高。结论抑制xCT的表达可以使人类高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231发生自噬，降解转录因子Snail，从而抑制EMT，降低人类高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231的转移能力。关键词：乳腺癌细胞MDA-MB-231；自体吞噬；EMT；SASP

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综述

整合因子复合体的研究进展

思兰兰

2015, 39(5): 0-0.

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[摘要] 整合因子复合体（Integrator complex）是一个新近发现的多功能蛋白质复合物，由至少12个进化上保守的亚基（Integrator complex subunits, INTS1~INTS12）组成。该复合体能够与RNA聚合酶II大亚基的具有重复氨基酸序列的C末端相互作用，进而介导小核RNA（Small nuclear RNA, snRNA）U1/U2的3’端加工。整合因子复合体还能够通过与RNA聚合酶II、延伸负调控因子NELF和转录延伸因子Spt5发生相互作用，调控NELF介导的RNA聚合酶II的暂停-延伸，进而调控mRNA的合成。近年来，有研究陆续报道整合因子复合体还在DNA损伤应答、核周动力蛋白的聚集、细胞核内卡哈尔体（Cajal body）的完整性、脂肪细胞的分化成熟、造血、初级纤毛的形成、肿瘤的发生发展和病毒感染等方面发挥重要作用。本文对整合因子复合体的研究进展进行了综述。

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实验研究

2005-2013年中国麻疹流行病学分析

吴义城,张秀山

2015, 39(5): 0-0.

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[摘要] 目的分析2005-2013年中国麻疹的流行病学特征，探究其流行强度，为合理分配卫生资源和全面消除麻疹提供依据。方法以2005-2013年中国麻疹疫情监测数据及人口信息资料为研究对象，采用描述流行病学方法对其进行分析。结果 2005-2013年中国31个省（市、区）均有报告麻疹病例，共报告发病597 594例，年平均发病率5.07/10万；共报告死亡366例，年平均死亡率0.0031/10万；其中男性355 409例（59.47%），女性242 185例（40.53%），发病者以10岁以下儿童居多，共占总发病数的64.64%。结论 2005-2013年中国麻疹发病总体呈下降趋势，发病主要集中于春季，不同年龄、性别的发病情况存在统计学差异，发病在空间分布上有明显的异质性。

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QseBC双组份调控系统对伤寒沙门菌动力的调节作用

NIBIN

2015, 39(5): 0-0.

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目的研究伤寒沙门菌QseBC双组份调控系统对伤寒菌动力的调节作用。方法比较伤寒沙门菌野生株（WT）、qseB缺陷株（ΔqseB）和qseC缺陷株（ΔqseC）动力差异，选取主要鞭毛基因flhD进行实时定量RT-PCR检测，同时检测qseB的表达水平；构建qseB高表达株，比较其与空载体对照株动力和flhD表达差异。结果与WT相比，ΔqseB动力无变化，ΔqseC动力减弱；在ΔqseC中，flhD表达量下调约4倍而qseB表达上调；qseB高表达株动力较WT减弱，flhD表达下调。结论 QseBC双组份调控系统能够调节伤寒菌动力和主要鞭毛基因flhD的表达；qseB高表达时抑制细菌动力。

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实验研究

IKKa通过调控p38K活化介导紫外线诱导的p53磷酸化修饰反应

王红丽

2015, 39(5): 0-0.

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目的探讨IKK激酶催化亚基IKK在紫外线(Ultraviolet radiation, UV)诱导的细胞反应中介导p53活化的信号传递机制。方法采用双荧光素酶报道基因分析系统检测UVB刺激反应状态下p53的转录激活活性。Western印迹方法检测IKK、p53、p38K蛋白表达水平和诱导活化状态。结果 UVB能够显著地在野生型小鼠成纤维细胞中诱导p53发生磷酸化修饰反应;同时转录激活活性显著提高，IKKa基因敲除后以上活化反应被显著抑制，而恢复IKK表达水平后这种活化反应得以恢复。同样条件下IKK也能够调节p38K的诱导活化，抑制p38K活性显著下调p53的诱导活化水平。结论 IKKa能够通过调控p38K活化进而介导UVB诱导的p53磷酸化修饰反应。

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综述

埃博拉病毒生物学特性研究

张毅,曲英龙,郭振东,赵思言,付莹莹,赵红艳,王中一,赵宗正,刘林娜,钱军

2015, 39(5): 0-0.

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埃博拉病毒病是一种能够引发埃博拉出血热的人畜共患烈性传染病。2014年蔓延西非三国的埃博拉病毒已经成为全球性公共卫生新的重大威胁。本文通过对埃博拉病毒的结构特征、传播特点、作用方式、动物模型等方面进行综述，旨在对埃博拉病毒生物学特性的全面了解及针对该病新型疫苗和抗病毒药物的研制奠定基础。

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可选择性多聚腺苷酸化的生物学功能

ZhangHongxing

2015, 39(5): 0-0.

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可选择性多聚腺苷酸化（alternative polyadenylation，APA）是一种普遍存在的基因调控机制。APA事件的发生能够使一个基因产生多种mRNA转录本，从而增加转录本的复杂度。选择不同的多聚腺苷酸化位点可以使不同转录本具有不同的编码序列，或者具有不同长度的3’端非翻译区（3’ untranslated region, 3’UTR）。不同长度的3’UTR可引起RNA结合蛋白或微小RNA的结合位点发生变化，进而影响RNA的稳定性、定位和翻译效率。近年来，APA的研究涉及APA的形成过程、调控APA的机制以及APA对生物学过程和疾病的影响。本文对APA的上述研究进展进行了综述。

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实验研究

咪达唑仑经鼻给药在最大电休克发作及戊四唑惊厥模型的抗惊作用

田凯

2015, 39(5): 0-0.

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[摘要] 目的在大鼠最大电休克发作及戊四唑惊厥模型上，评价比较咪达唑仑与地西泮经鼻给药的抗惊作用。方法建立大鼠最大电休克发作（maximal electroshock seizure,MES）及戊四唑惊厥发作阈模型（metrazol seizure threshold test，MST），评价不同剂量咪达唑仑经鼻给药的抗惊作用，并与经典抗癫痫药物—地西泮进行比较。HE染色观察给药后72h各组动物海马、皮层及杏仁核组织病理学变化。结果不同剂量咪达唑仑经鼻预防给药，均可剂量依赖性对抗MES及MST；等剂量给药条件下，其对惊厥对抗作用明显优于地西泮（P<0.05/0.01）。病理学结果显示，咪达唑仑与地西泮经鼻预防给药均可减轻癫痫所致海马、皮层及杏仁核神经元细胞的损伤，抑制小胶质细胞增多及炎性细胞浸润。结论咪达唑仑经鼻给药，在经典癫痫模型上均具显著抗惊作用，并可显著抑制癫痫所致脑损伤。

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实验研究

过氧化氢诱导间充质干细胞衰老模型的建立

刘洋

2015, 39(5): 0-0.

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[摘要]目的：建立间充质干细胞(MSCs)衰老模型，探讨其衰老的相关生物学改变，从而为衰老相关研究提供有效的细胞模型工具。方法：取新生胎盘组织利用酶消化法分离纯化获得人胎盘源间充质干细胞。将第3代细胞，接种到培养皿。在完全培养基基础上分别加入终浓度100、200、300nmol/L的过氧化氢（H2O2）培养2 h，处理结束后更换为完全培养基继续培养24h。进行MTT、细胞周期分析、分化诱导实验和β-半乳糖苷酶染色验证衰老MSCs模型的建立，应用 RT-PCR法检测衰老相关基因p16、p21、p53 mRNA的表达变化。结果:与对照组比较，200nmol/L H2O2作用 2 h，倒置显微镜下见MSCs形态较为宽大扁平；MTT 吸光度值显著下降，流式检测结果显示细胞周期处于G0/G1期细胞比例增加；成脂、成骨和成软骨分化能力减弱；β-半乳糖苷酶阳性细胞百分比显著升高；p16、 p21 、p53 mRNA表达水平显著升高。结论：200nmol/L H2O2作用 2 h可建立间充质干细胞体外衰老模型，该模型细胞的生物学变化可能是由p16、 p21、 p53细胞周期蛋白的活性调节引起的。

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乳腺癌前哨淋巴结术中快速检测新方法： RT-LAMP与GeneSearch技术的对比研究

林镪

2015, 39(5): 0-0.

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【摘要】目的验证本课题组前期建立的乳腺癌前哨淋巴结术中快速分子病理检测技术（reverse-transcriptionloop-mediated isothermal amplification ,RT-LAMP法）的可靠性。方法收集北京市七家三甲医院134例乳腺癌前哨淋巴结样本，分别应用RT-LAMP法与经过美国FDA批准的GeneSearch技术进行检测，比较两种方法检测结果的一致性。结果以GeneSearch技术为金标准，RT-LAMP方法的敏感性为96.2%（25/26)，特异性为96.3%（104/108），两种方法的一致率为96.3%（129/134）, 统计学一致性分析Kappa=0.886,P<0.001。结论本课题组前期建立的RT-LAMP方法与GeneSearch技术相比有较高的一致性，具有快速、便捷、低成本等特点, 在乳腺癌前哨淋巴结术中分子病理检测方面具有良好的应用前景。

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调查研究

复杂随机抽样数据的多重线性回归分析方法及其应用

SunRiyang,HuLiangping

2015, 39(5): 0-0.

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目的探讨观测权重与随机抽样权重在复杂随机抽样数据线性回归分析中的意义和作用。方法基于蒙特卡洛随机模拟思想，采用SAS中REG和SURVEYREG两个不同的多重线性回归分析过程分别对同一批复杂随机抽样数据（N=6756）在不同随机抽样率条件下进行回归建模，对所得结果进行比较。结果在未考虑和考虑观测权重与随机抽样权重的多重线性回归模型拟合的结果中，自变量的偏回归系数、标准差及P值的大小都有所不同。结论在对基于不同抽样率的复杂随机抽样资料，尤其是分层随机抽样调查资料的回归建模中，采用多重线性回归模型拟合资料时，如果将调查数据的综合权重纳入统计分析，方能更加准确灵敏地进行回归系数的参数估计和对结果变量的统计预测。

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