实验研究
何志利
2017, 41(12): 0-0.
目的 利用Red重组系统构建肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhage E.Coli,EHEC)z5150 基因缺失突变株,并探究z5150基因在细胞粘附过程中的作用。方法 本研究在菌体内过度表达z5150 基因测细菌生长曲线来验证其毒性。应用PCR技术,扩增出含有卡纳霉素抗性基因的目的基因上下游同源臂片段,电转入含有pKD46质粒的EHEC中,在阿拉伯糖诱导下使打靶片段重组到基因组上。卡纳霉素基因的两端包含FRT位点,pFLP2质粒可以介导FLP位点专一性重组去除抗性标记。送DNA测序验证目的基因缺失后,通过菌株感染HT29细胞来检测缺失株对大肠上皮细胞粘附作用。结果与结论 成功构建EHEC△z5150 缺失突变株。z5150 的缺失不影响细菌的正常生长,但过度表达后明显抑制细菌生长,发挥毒素效应。EHEC△z5150缺失突变株与野生株相比,对肠上皮细胞粘附能力明显增强。该研究为EHEC基因功能研究提供了基因敲除技术,证明了RelE家族z5150参与EHEC细胞粘附,为进一步研究肠出血性大肠杆菌致病机制奠定了基础。